Braz J Med Biol Res. listopadu 2001, Svazek 34(11) 1415-1420

Sérum antigliadin hladiny protilátek jako screeningové kritérium, než jejunal biopsie indikace celiakie v rozvojové zemi,

M. Bahia1, A. Rabello2, G. Brasileiro Filho3 a F. J. Penna1

1Serviço Gastroenterologie Pediatrické Oddělení Pediatrie, Ff de Medicina, Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, MG, Brazílie
2Centro de Pesquisas René Rachou, Belo Horizonte, MG, Brazílie
3Departamento de Anatomia Patológica, Ff de Medicina, Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, MG, Brazílie

Abstrakt
Úvod
Pacienti a Metody
Výsledky
Diskuse

Poděkování
Korespondence a Poznámky pod čarou

Abstrakt

Cílem této studie bylo zjistit účinnost detekce antigliadin imunoglobuliny G (IgG a IgA), pro diagnózu celiakie v rozvojové zemi, protože ostatní enteropathies může měnit hladiny těchto protilátek. Byly studovány tři skupiny: 22 pacientů s celiakií (průměrný věk: 30.6 měsíců), 61 pacientů s jinými enteropatiemi (průměrný věk: 43,3 měsíce) a 46 pacientů bez enteropatií (průměrný věk: 96,9 měsíce). Antigliadin IgG a IgA ELISA vykazovaly citlivost 90,9 a 95,5%. S hypotetické hodnoty prevalence v rozmezí od 1:500 do 1:2000 liveborns, pozitivní prediktivní hodnota se pohybovala od 8,5 do 2,3% pro IgG a z 4,8 1,1%, pro IgA. Vzhledem k pacientům bez enteropatií byla specificita 97,8% pro IgG a 95,7% pro IgA. U pacientů s jinými enteropatiemi byla specificita 82,0 a 84,1%. Pokud byli pacienti s jinými enteropatiemi a bez nich považováni za celek, specificita byla 88,8 a 91,6%. Specificita pozitivního IgG nebo IgA byla 93,5% u dětí bez enteropatií a 78,7% v přítomnosti jiných enteropatií. Negativní prediktivní hodnota pro hypotetické prevalence v rozmezí od 1: 500 do 1: 2000 liveborns byla 99,9%. Tedy i v rozvojových zemích, kde prevalence non-celiac enteropathies je vysoká, stanovení sérových antigliadin hladiny protilátek je užitečný screeningový test před jejunal biopsie při vyšetřování střevní malabsorpce.

Klíčová slova: celiakie, enteropathies, antigliadin protilátky,

Úvod

v Současné době kritéria pro diagnózu celiakie požadovat prokázání typické změny v malé střevní (jejunal) biopsie následuje klinické zlepšení na bezlepkové dietě. Podle stanovených kritérií pro potvrzení diagnózy celiakie jsou zapotřebí tři po sobě jdoucí střevní biopsie (1). Tento invazivní postup vyžaduje vyškolený personál a je pro pacienty nepříjemný. Celková doba diagnostického vyšetření je navíc více než dva roky.

byly získány cenné zkušenosti s kvantifikací antigliadinových protilátek jako další diagnostické metody v několika rozvinutých zemích (2-9). Tato metoda pomáhá předcházet nedostatku detekce případů celiakie a také vyhnout se mnoha zbytečným jejunálním biopsiím. Nicméně, i přes významné pokroky v imunologické metody pro diagnostiku celiakie, vysoký výskyt non-celiac enteropathies, že může indukovat syntézu antigliadin protilátky, mohou omezit jejich proveditelnosti v rozvojových zemích (10). V důsledku toho existuje spor o užitečnosti detekce protilátek v rozvojových zemích.

cílem této studie bylo zhodnotit profil a určit citlivost a specifičnost enzymové-linked immunosorbent assay (ELISA) pro stanovení antigliadin imunoglobuliny G (IgG a IgA) protilátky v Brazilské děti s celiakií, s jinými enteropathies a bez gastrointestinálních příznaků.

Pacienti a Metody

Pacienti

v roce 1991-96 období, tři studijní skupiny byly vybrány na Gastroenterologii Kliniky fakultní Nemocnice, Federal University of Minas Gerais. Skupiny se skládala z dětí s klinickým obrazem sugestivní střevní malabsorpce, jako je chronická gastroenterologické příznaky nebo nízkého vzrůstu (pod 3. percentilem), které byly předloženy jejunal biopsie a odběru krve, jako součást rutinní klinické hodnocení. Informovaný souhlas s účastí na tomto výzkumu byl získán od rodičů dětí. Projekt byl schválen etickou komisí pro výzkum Federální univerzity v Minas Gerais.

studijní skupiny

skupina celiakie. Dvacet dva pacientů s střevní malabsorpce, představující závažné jejunal atrofie klků a kubickým epitelu povrchu s mnoha intraepiteliální lymfocyty.

jiná skupina enteropatie. Šedesát jedna pacientů s gastroenterologickými příznaky, jako je břišní distenze nebo bolest nebo chronický průjem, s normálními nebo nespecifickými změnami střevní sliznice.

kontrolní skupina. Čtyřicet šest pacientů bylo podrobeno hodnocení nízkého vzrůstu, bez hormonálních nebo gastroenterologických příznaků as normální jejunální biopsií.

obecný popis pacientů je uveden v tabulce 1. Průměrný věk a následně hmotnost a výška byly vyšší v kontrolní skupině než v ostatních skupinách, které byly zahrnuty do studie etiologické diagnózy nízkého vzrůstu, obvykle definované po třech letech věku.

metody

detekce Antigliadinu IgG a IgA. Sérum získané centrifugací z 5 ml krve od každého pacienta byl skladován při -20 ° c až do použití. ELISA pro detekci antigliadinových protilátek byla provedena metodou Huff et al. (11), s malými úpravami. Krátce, ELISA destičky jsou potaženy 100 µl na jamku 50 µg/ml surového gliadinu (Sigma, St. Louis, MO, USA) v karbonátovém pufru při 4oC po dobu 12 h a blokovány s 150 µl na jamku 2% bovinní albumin v PBS při 37oC po dobu 60 min. Séra (100 µl na jamku) v poměru 1:100 (pro IgA detekce) nebo 1:500 (pro IgG detekce), pak byly ponechány stát při 37oC po dobu 60 min ve dvou vyhotoveních podle talíř protokol, který zahrnoval pozitivní a negativní kontroly. Poté bylo přidáno sto mikrolitrů na jamku peroxidázou vázané anti-lidské IgG nebo IgA protilátky (Sigma)a destičky byly inkubovány při 37oC po dobu 60 minut. Vývoj barvy byl dosažen za použití 100 µl na jamku ABTS (2,2′ – azinobis (kyselina 3-ethylbenzthiazolin-6-sulfonová); Sigma). Reakce byla přerušena po 10 minutách s 10% SDS (Sigma) a absorbance byla odečtena při 405 nm pomocí čtečky ELISA. Po každém z výše popsaných kroků byly desky pětkrát promyty PBS obsahujícím 5% Tween 20. Mezní bod byl definován jako střední hodnota plus dvě směrodatné odchylky pro skupinu 20 normálních dětí, že 0.022 pro IgA (průměr = 0.0065, SD = 0.0076) a 0.103 pro IgG (průměr = 0.0393, SD = 0.032).

jejunální biopsie

jejunální biopsie byly získány perorální cestou za použití dětské tobolky Carey umístěné pod úhlem Treitze a vizualizované rentgenem. Slizniční fragmenty byly namontovány na Millipore filtr s huňaté povrchu směrem nahoru, a okamžitě ponoří do 10% roztoku formalinu, vložené do parafínu, barvených hematoxylinem-eosinem a pravidelné acid Schiff a zkoumal podle způsobu Pereira et al. (12). Pro definici celiakie byly zváženy následující aspekty: nepřítomné nebo zbytkové klky, kvádrový a bazofilní epiteliální povrch obsahující mnoho interepiteliálních lymfocytů (12).

Statistická analýza

Data byla analyzována pomocí statistického EPI INFO v. 6. 0 a softwaru SPSS (13). Poměry byly porovnány chí-kvadrátovým testem a prostředky byly porovnány Kruskal-Wallisovým testem. Analýza rozptylu (ANOVA) byla použita pro porovnání prostředků a Scheffé test byl použit k identifikaci skupin odpovědných za rozdíly. 95% interval spolehlivosti (95% CI) byl definován pro stanovení senzitivity, specificity a prediktivních hodnot. Úroveň významnosti byla stanovena na 5%.

pro výpočet prediktivních hodnot byly použity hypotetické incidence 1: 500, 1: 1000 a 1: 2000 na základě údajů z literatury z jiných zemí (14-17).

Výsledky

Antigliadin protilátky,

Antigliadin IgA protilátek byly zjištěny u 21 z 22 pacientů s celiakií, což má za následek citlivost 95.5% (95% CI: 75.1 na 99.8%). Specificita byla 88,5% při zvažování pacientů z jiné skupiny enteropatie, protože 7 z 61 pacientů vykazovalo pozitivní protilátky proti antigliadinu IgA. Když se tyto protilátky byly hodnoceny v kontrolní skupině, pouze 2 z 46 pacientů byly pozitivní, specifičnost 95,7% (95% CI: 84.0 na 99.2%). Když byly ostatní enteropatie a kontrolní skupiny posuzovány společně, bylo 9 ze 107 pacientů pozitivních na protilátky proti antigliadinu IgA s celkovou specificitou 91,6%.

Antigliadin IgG protilátky byly pozitivní u 20 z 22 pacientů s celiakií, což má za následek citlivost 90.9% (95% CI: 69.4 na 98.4%). Specificita byla 82% při zvažování pacientů z jiné skupiny enteropatie, protože 11 z 61 pacientů vykazovalo pozitivní antigliadin IgG. Když se tyto protilátky byly hodnoceny v kontrolní skupině, pouze jeden ze 46 pacientů byl pozitivní, což má za následek specifičnost 97.8% (95% CI: 87.0 až 99,9%). Dohromady 12 107 pacientů, které tvoří další enteropatie a kontrolní skupiny mělo pozitivní antigliadin IgG, s celkovou specificita 88%.

hodnoty absorbance pro antigliadin IgG a IgA jsou uvedeny v tabulce 2. Významný rozdíl byl pozorován v průměrných hodnotách absorbance zaznamenaných pro tři studijní skupiny pro IgA (Obrázek 1) a IgG (Obrázek 2) s použitím ANOVA. Při použití scheffého testu byl rozdíl přičítán rozdílům mezi kontrolní skupinou a jinými skupinami enteropatie a celiakie oproti kontrole. Nebyl pozorován žádný rozdíl mezi ostatními enteropatiemi a kontrolními skupinami.

pozitivní a negativní Prediktivní hodnoty byly vypočteny s ohledem hypotetické hodnoty incidence celiakie v rozmezí od 1:500 do 1:2000 liveborns. Pozitivní prediktivní hodnoty byly velmi nízké, v rozmezí od 8,5 2,3% a z 4,8 1,1% pro IgG a IgA, respektive. Nicméně, vysoká negativní prediktivní hodnota 99.9% bylo zjištěno pro IgG a IgA (Tabulka 3).

Obrázek 1. Hodnoty absorbance ELISA antigliadinových IgG protilátek u celiakie (CD, N = 22), kontrolní (CO, N = 46) a jiné enteropatie (OE, N = 61) skupiny. Tečkovaná čára představuje mezní hodnotu. Plné čáry představují průměr hodnot absorbance pro každou skupinu.

Obrázek 2. Hodnoty absorbance ELISA antigliadinových IgA protilátek u celiakie (CD, N = 22), kontrolní (CO, N = 46) a jiné enteropatie (OE, N = 61) skupiny. Tečkovaná čára představuje mezní hodnotu. Plné čáry představují průměr hodnot absorbance pro každou skupinu.

Diskuse

hlavním cílem této studie bylo vyhodnotit užitečnost antigliadin kvantifikaci protilátek při screeningu pro jejunal biopsie, indikace průběhu vyšetřování příčin enteropathies a nízké postavy, a to zejména v těch dětí s okolní enteropathies.

V posledních dvou desetiletích, stanovení protilátek v séru, se ukázal být užitečným nástrojem pro diagnostiku a sledování pacientů na bezlepkové dietě (2,3,18-21). Většina studií se však týká populací z rozvinutých zemí, což vyvolává otázky o užitečnosti těchto testů v nerozvinutých zemích, kde vysoká frekvence tzv.

V této studii, vysoká citlivost na antigliadin IgG a IgA protilátek, stanovení, 90.9 a 95,5%, respektive, byl pozorován u dětí vystaveny jejunal biopsie na základě rutinní klinické indikace, s typickými patologickými nálezy celiakie.

dva další testy představují alternativní sérologické nástroje pro diagnostický screeningový test celiakie. Stanovení anti-endomysium antibodies (22-24) a anti-tissue transglutaminase (25,26), oba představují vysokou citlivost a specifičnost, vyžaduje více in-hloubkové studie za účelem stanovení jeho užitečnost v rozvojových zemích. Grodzinski (27) naznačuje, že antigliadin protilátek by měl být použit jako screeningový test a anti-endomysium antibodies jako konfirmační test před střevní biopsie. Několik vyšetřovatelů však poukázalo na možnost falešně negativní detekce protilátek (9,28,29). Výhodou detekce antigliadinových protilátek je proveditelnost techniky ELISA a nízké náklady.

Khoshoo et al. (30), v Indii, oznámila, že antigliadin IgG a IgA protilátky byly významně vyšší u dětí se celiakie než u dětí s jinými enteropathies.

V Brazílii, antigliadin protilátky byly zkoumány u dětí s celiakií, což ukazuje citlivost 90.4% pro IgG a 64,2%, pro IgA a specificitu 87.0% pro IgG a 92,1% pro IgA. Autoři se domnívají, že pozitivní protilátky spojené s charakteristickými histologickými nálezy potvrzují diagnózu celiakie. Nicméně, malý počet pacientů byly testovány pro IgA tím, Medeiros (31): 14 z 29 pacientů s celiakií, 49 106 s jinými enteropathies, 27 z 45 s vleklým průjmem a 26 56 kontrolních pacientů.

mnoho studií používalo skupiny dospělých jako kontrolu, některé z nich bez jejunální biopsie (4,32-36). Obecně se antigliadin IgA ukázal být specifičtější pro celiakii. Tucker et al. (36) v souladu se současnými výsledky byla pozorována vyšší specificita pro IgG.

i když četnost celiakie onemocnění v naší zemi nebyla odhaduje, že hypotetické hodnoty nám umožňují dospět k závěru, že pokud dítě nemá IgG a ne antigliadin IgA protilátky má 99,9% šanci, že nemá celiakii, bez nutnosti být předloženy jejunal biopsie.

1. McNeish AS & Anderson CM (1974). Celiakie; porucha v dětství. Klinická Gastroenterologie, 3: 127-144.

2. Kilander AF, Nilsson LA & Gillberg R (1987). Serum antibodies to gliadin in coeliac disease after gluten withdrawal. Scandinavian Journal of Gastroenterology, 22: 29-34.

3. Stenhammar L, Kilander AF, Nilsson LA, Stromberg L & Tarkowski A (1984). Serum gliadin antibodies for detection and control of childhood coeliac disease. Acta Paediatrica Scandinavica, 73: 657-663.

4. Volta U, Lenzi M, Lazzari R, Cassani F, Collina A, Bianchi FB & Pisi E (1985). Protilátky proti gliadinu detekované imunofluorescencí a metodou mikro-ELISA: markery aktivního dětského a dospělého celiakie. Gut, 26: 667-671.

5. Lindberg T, Nilsson LA, Borulf S, Cavell B, Fallstrom SP, Jansson U, Stenhammar JE & Stintzing G (1985). Sérové IgA a IgG gliadinové protilátky a poškození sliznice tenkého střeva u dětí. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition, 4: 917-922.

6. Stahlberg MR, Savilahti E & Viander M (1986). Protilátky proti gliadinu ELISA jako screeningový test na dětskou celiakii. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition, 5: 726-729.

7. Vitoria JC, Arrieta A, Astigarraga I, Garcia-Masdevall D & Rodriguez-Soriano J (1994). Použití sérologických markerů jako screeningového testu u rodinných příslušníků pacientů s celiakií. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition, 19: 304-309.

8. Altuntas B, Kansu A, Ensari a & Girgin N (1998). Celiakie u tureckých dětí s krátkým postavením a hodnota antigliadinové protilátky v diagnostice. Acta Paediatrica Japonica, 40: 457-460.

9. Chartrand LJ, Agulnik J, Vanounou T, Russo PA, Baehler P & Seidman EG (1997). Účinnost antigliadinových protilátek jako screeningového testu na celiakii u dětí. Canadian Medical Association Journal, 157: 527-533.

10. Walker-Smith JA, Guandalini S, Schmitz J, Shmerling DH & Visakorpi JK (1990). Revidovaná kritéria pro diagnostiku celiakie. Archivy nemocí v dětství, 65: 909-911.

11. Huff JC, Weston WL & Zirker DK (1979). Pšeničné proteinové protilátky při dermatitis herpetiformis. Journal of Investigative Dermatology, 73: 570-574.

12. Pereira DR, Weinstein WM & Rubin CE (1975). Sympozium o patologii gastrointestinálního traktu. Část II. biopsie tenkého střeva. Lidská Patologie, 6: 157-217.

13. Dean AG, Dean JA, Coulombier D, Bremde KA, Smith, DC, Burton AH, Dicker RC, Sullivan K, Fagan RF & Arner TG (1994). Epi Info, verze 6: textový, databázový a statistický Program pro epidemiologii na mikropočítačích. Centra pro kontrolu a prevenci nemocí, Atlanta, GA.

14. Mylotte S, Egan Mitchell B, McCarthy CF & McNicholl B (1973). Výskyt celiakie na západě Irska. British Medical Journal, 1: 703-705.

15. Rossipal E (1975). Výskyt celiakie u dětí v Rakousku. Zeitschrift für Kinderheilkunde, 119: 143-149.

16. Hed J, Lieden G, Ottosson E, Strôm M, Walan, Groth O, Sjôgren F & Franzen L (1984). IgA antigliadinové protilátky a jejunální slizniční léze u zdravých dárců krve. Lancet, 2: 215.

17. Stevens FM, Egan-Mitchell B, Cryan E, McCarthy CF & McNicholl B (1987). Klesající výskyt celiakie. Archivy nemocí v dětství, 62: 465-468.

18. Kilander AF, Dotevall G, Fallstrom SP, Gillberg ZNOVU, Nilsson LA & Tarkowski (1983). Hodnocení gliadinových protilátek pro detekci celiakie. Skandinávský žurnál gastroenterologie, 18: 377-383.

19. Sbolgi P, Mangiante G, Ruffa G, Caprioli F, Bartolozzi G, Cinigolani M & Gemme G (1991). Gli anticorpi antigliadina nella diagnosi e nel follow-up della malattia celiaca. Minerva Pediatrica, 43: 783-788.

20. Bodé S, Weile B, Krasilnikoff PA & Gudmand-Hoyer E (1993). Diagnostická hodnota testu na protilátky proti gliadinu u celiakie u dětí: prospektivní studie. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition, 17: 260-264.

21. Carroccio, Iacono G, Montalto G, Cavataio F, Soresi M, Kazmierska & Notarbartolo (1993). Imunologické a absorpční testy u celiakie: mohou nahradit střevní biopsie? Skandinávský žurnál gastroenterologie, 28: 673-676.

22. Burgin-Wolff, Pohled H, Hadziselimovic F, Huber H, Lentze MJ, Nusslé D & Reymond-Berthet C (1991). Stanovení antigliadinových a antiendomysiových protilátek pro celiakii. Archivy nemocí v dětství, 66: 941-947.

23. Lerner A, Kumar V & Iancu TC (1994). Immunological diagnosis of childhood coeliac disease: comparison between antigliadin, antireticulin and antiendomysial antibodies. Clinical and Experimental Immunology, 95: 78-82.

24. Lindquist BL, Rogoziniski T, Moi H, Danielsson D & Olcên P (1994). Endomysium and gliadin IgA antibodies in children with coeliac disease. Scandinavian Journal of Gastroenterology, 29: 452-456.

25. Dieterich W, Ehnis T, Bauer M, Donner P, Volta U, Riecken EO & Schuppan D (1997). Identifikace tkáňové transglutaminázy jako autoantigenu celiakie. Přírodní Medicína, 3: 797-801.

26. Dieterich W, Laag E, Schôpper H, Volta U, Fergunson, Gillet H, Riecken EO & Schuppan D (1998). Autoprotilátky k tkáňové transglutamináze jako prediktory celiakie. Gastroenterologie, 115: 1317-1321.

27. Grodzinsky E (1996). Screening celiakie u zjevně zdravých dárců krve. Acta Paediatrica, 412 (Suppl): 36-38.

28. Rostami AM, Sater RA, Bird SJ, Galetta S, Farber RE, Kamoun M, Silberg DH, Grossman RI & Pfohl D (1999). A double-blind, placebo-controlled trial of extracorporeal photopheresis chronic progressive multiple sclerosis. Multiple Sclerosis, 5: 198-203.

29. Altuntas B, Gul H, Yarali N & Ertan U (1999). Etiology of chronic diarrhea. Indian Journal of Pediatrics, 66: 657-661.

30. Khoshoo V, Bhan MK, Puri S, Jain R, Jayashree S, Bhatnagar RS, Kumar R & Stintzing G (1989). Sérum antigliadin protilátek profil v dětství vleklé průjmy v důsledku celiakie a jiné příčiny v rozvojové zemi. Skandinávský žurnál gastroenterologie, 24: 1212-1216.

31. Medeiros EHGR (1992). Anticorpo sérico antigliadina no diagnóstico e seguimento da doença celíaca. Disertační práce, Escola Paulista de Medicina, São Paulo, SP, Brazílie.

32. Taylor KB, Truelove SC, Thompson dl & Wright R (1961). Imunologická studie celiakie a idiopatické steatorey; sérologické reakce na lepek a mléčné bílkoviny. British Medical Journal, 2: 1727-1731.

33. Walia BNS, Sidhu JK, Tandon BN, Ghai AP & Bhargava S (1966). Celiakie u Severoindických dětí. British Medical Journal, 2: 1233-1234.

34. Burgin-Wolff, Bertele RM, Berger R, Pohled H, Poškozuje HK, Jen M, Khanna S, Schurmann K, Signer E & Tomovic D (1983). Spolehlivý screeningový test na dětskou celiakii: fluorescenční imunosorbentní test na protilátky proti gliadinu; prospektivní multicentrická studie. Journal of Pediatrics, 102: 655-660.

35. Husby S, Foged N, Oxelius va & Svehag SE (1986). Sérová IgG podtřída protilátky proti gliadinu a jiným dietním antigenům u dětí s celiakií. Klinická a experimentální imunologie, 64: 526-535.

36. Tucker NT, Barghuthy FS, příhoda TJ, Kumar V, Lerner a & Lebenthal E (1988). Antigliadinové protilátky detekované enzymovým imunosorbentovým testem jako marker dětské celiakie. Journal of Pediatrics, 113: 286-289.

Poděkování

Jsme vděční zaměstnanců Pediatrické Gastroenterologie Služby, fakultní Nemocnice, Federal University of Minas Gerais, pro odkazování pacientů a zaměstnanců Centro de Pesquisas René Rachou pro technickou pomoc.