Otto Frank opiskeli lääketiedettä Münchenissä ja kielissä vuosina 1884-1889 (lisensiaatti Münchenissä 1889). Vuosina 1889-1891 hän sitoutui koulutusta matematiikan, kemian, fysiikan, anatomian ja eläintieteen Heidelberg, Glasgow, München ja Strasbourg. Sen jälkeen hän työskenteli vuoteen 1894 Carl Friedrich Wilhelm Ludwigin assistenttina Fysiologisches Institutissa Leipzigissa. Siellä vuonna 1892 hän suoritti tohtorintutkinnon (tohtorin).

tämän jälkeen Frank työskenteli vuodesta 1894 assistenttina Carl von Voit ’ n fysiologisessa instituutissa Münchenissä, jossa hän tutki sydämen toimintaa käyttäen menetelmiä, jotka on johdettu aikaisemmista luustolihasten supistumista koskevista termodynaamisista analyyseistä. Hänen työstään käyttäytymistä sydänlihakseen oli aihe hänen post doctoral työtä. Vuonna 1902 hänestä tuli ylimääräinen professori ja 1905-1908 hän sitoutui lisätyötä tästä aiheesta ennen tulossa täysi professori (Ordinariat). Sitten hän palasi Müncheniin jatkamaan tätä työtä. Tri Carl J. Wiggers vieraili Frankin laboratoriossa vuonna 1912 ja löysi Frankista ”loistavan analyytikon, taitavan systematistin, lahjakkaan matemaatikon ja luovan ajattelijan…”, mutta salamyhkäinen ja vaikea työskennellä. Wiggers palasi Yhdysvaltoihin syksyllä 1912 ’salakuljetettuaan’ kopioita joistakin Frankin laitteista ulos hänen kanssaan, vaikka tämä Wiggers ja Frank näyttävät pitäneen yllä sydämellisiä suhteita myöhemmin. Frank näyttää olleen vaativa opettaja ja Richard Bing, Journal of Molecular and Cellular Cardiology-lehden toimittaja, joka opiskeli Frankin kanssa, muistutti häntä”…pyhä Kauhu, vihaava keskinkertaisuus, ja monet opiskelija bit pöly in the examination in Physiology”. Frank jatkoi työtään Münchenissä, kunnes joutui jäämään eläkkeelle vuonna 1934 natsihallinnon vastustamisen vuoksi.