Braz J Med Biol Res, November 2001, Volum 34(11) 1415-1420

Serum antigliadin antistoffnivåer som et screeningskriterium før jejunal biopsi indikasjon for cøliaki i et utviklingsland

M. Bahia1, A. Rabello2, G. Brasileiro filho3 og f. j. Penna1

1serviç Av Gastroenterologi Pediatrisk, Avdeling For Pediatrisk, Faculdade De Medicina, Universidade De Minas Gerais, Belo Horizonte, MG, Brasil
2centro De Pesquisas René Rachou, Belo Horizonte, MG, Brasil
3Departamento De Anatomia Patológica, Faculdade De Medicina, Universidade De Minas Gerais, Belo Horizonte, MG, Brasil

Abstrakt
Introduksjon
pasienter Og Metoder
resultater
Diskusjon
Korrespondanse og Fotnoter

abstract

målet med denne studien var å bestemme effekten av påvisning av antigliadin immunglobuliner g og a (igg og iga) for diagnostisering av cøliaki I et utviklingsland, siden andre enteropatier kan endre nivåene av disse antistoffene. Tre grupper ble studert: 22 pasienter med cøliaki (gjennomsnittlig alder: 30.6 måneder), 61 pasienter med andre enteropatier (gjennomsnittsalder: 43,3 måneder) og 46 pasienter uten enteropatier (gjennomsnittsalder: 96,9 måneder). Antigliadin IgG og IGA ELISA viste sensitivitet på henholdsvis 90,9 og 95,5%. Med hypotetiske prevalensverdier fra 1:500 til 1:2000 liveborns, varierte den positive prediktive verdien fra 8,5 til 2,3% For IgG og fra 4,8 til 1,1% for Iga. Med tanke på pasientene uten enteropatier var spesifisiteten henholdsvis 97,8 og 95,7% For IgG og iga. Hos pasienter med andre enteropatier var spesifisiteten henholdsvis 82,0 og 84,1%. Når pasienter med og uten andre enteropatier ble vurdert som helhet, var spesifisiteten henholdsvis 88,8 og 91,6%. Specificiteten av positiv IgG eller iga var 93,5% hos barn uten enteropatier og 78,7% i nærvær av andre enteropatier. Den negative prediktive verdien for hypotetiske prevalenser som varierte fra 1:500 til 1:2000 liveborns var 99,9%. Således, selv i utviklingsland hvor forekomsten av ikke-cøliaki enteropatier er høy, bestemmelse av serum antigliadin antistoffnivåer er en nyttig screening test før jejunal biopsi i undersøkelsen av intestinal malabsorpsjon.

Nøkkelord: cøliaki, enteropatier, antigliadin antistoffer

Innledning

Foreløpig kriteriene for diagnostisering av cøliaki krever demonstrasjon av typiske endringer i tynntarmen (jejunal) biopsi etterfulgt av klinisk forbedring på en glutenfri diett. I henhold til etablerte kriterier for bekreftelse av diagnosen cøliaki, er det nødvendig med tre påfølgende tarmbiopsier (1). Denne invasive prosedyren krever utdannet personell og er ubehagelig for pasienter. Videre er den totale tidsperioden for diagnostisk undersøkelse mer enn to år.

Verdifull erfaring er oppnådd ved kvantifisering av antigliadin-antistoffer som en ekstra diagnostisk metode i flere utviklede land (2-9). Denne metoden bidrar til å forhindre mangel på deteksjon av tilfeller av cøliaki og også for å unngå mange unødvendige jejunale biopsier. Til tross for viktige fremskritt i de immunologiske metodene for diagnose av cøliaki, kan den høye forekomsten av ikke-cøliaki enteropatier, som kan indusere syntesen av antigliadin-antistoffer, begrense deres mulighet i utviklingsland (10). Følgelig er det kontroverser om bruken av antistoffdeteksjon i utviklingsland.målet med denne studien var å vurdere profilen og bestemme sensitiviteten og spesifisiteten til den enzymbundne immunosorbentanalysen (ELISA) for bestemmelse av antigliadinimmunoglobuliner G Og A (IgG og Iga) antistoffer hos Brasilianske barn med cøliaki, med andre enteropatier og uten gastrointestinale symptomer.

Pasienter og Metoder

Pasienter

i Perioden 1991-96 Ble Tre studiegrupper valgt På Gastroenterologiklinikkene På Universitetssykehuset, Federal University Of Minas Gerais. Gruppene besto av barn med et klinisk bilde som tyder på intestinal malabsorpsjon som kroniske gastroenterologiske symptomer eller lav vekst (under 3. persentil), som ble sendt til jejunalbiopsi og blodprøvetaking som en del av den rutinemessige kliniske evalueringen. Informert samtykke til å delta i denne undersøkelsen ble hentet fra barnas foreldre. Prosjektet ble godkjent Av Forskningsetikkutvalget Ved Federal University Of Minas Gerais.

Studiegrupper

Cøliaki gruppe. Tjueto pasienter med intestinal malabsorpsjon, som presenterer alvorlig jejunal villøs atrofi og kuboid epiteloverflate med mange intraepiteliale lymfocytter.

Annen enteropati gruppe. Sixty-one pasienter med gastroenterologiske symptomer som abdominal distensjon eller smerte eller kronisk diare, med normale eller uspesifikke endringer i tarmslimhinnen.

Kontrollgruppe. Førtiseks pasienter ble evaluert med lav vekst, uten hormonelle eller gastroenterologiske symptomer og med normal jejunalbiopsi.

den generelle beskrivelsen av pasientene er presentert i Tabell 1. Gjennomsnittlig alder og dermed vekt og høyde var høyere i kontrollgruppen enn i de andre gruppene som ble inkludert i studien for etiologisk diagnose av lav vekst, vanligvis definert etter tre år.

Metoder

antigliadin IgG og iga deteksjon. Serum oppnådd ved sentrifugering fra 5 ml blod tatt fra hver pasient ble lagret ved-20oc til bruk. ELISA for antigliadin antistoff deteksjon ble utført ved metoden For Huff et al. (11), med små modifikasjoner. KORT sagt ble elisa-plater belagt med 100 µ per brønn på 50 µ / ml rå gliadin (Sigma, St. Louis, MO, USA) i karbonatbuffer ved 4oC i 12 timer og blokkert med 150 µ per brønn med 2% bovint albumin i PBS ved 37oC i 60 min. Sera (100 µ per brønn) fortynnet 1:100 (for iga-deteksjon) eller 1: 500 (For IgG-deteksjon) ble deretter stående ved 37oC i 60 min i duplikat i henhold til en plateprotokoll som inkluderte positive og negative kontroller. Ett hundre mikroliter per brønn peroksidasebundet anti-humant IgG eller Iga-antistoff (Sigma) ble deretter tilsatt og platene ble inkubert ved 37oC i 60 min. Utvikling av farge ble oppnådd ved bruk av 100 µ per brønn AV ABTS (2,2 ‘ -azinobis(3-etylbenztiazolin-6-sulfonsyre); Sigma). Reaksjonen ble avbrutt etter 10 min med 10% SDS (Sigma) og absorbans ble lest ved 405 nm ved HJELP AV EN ELISA-leser. Etter hvert av de ovenfor beskrevne trinn ble platene vasket fem ganger med PBS inneholdende 5% Tween 20. Grensepunktet ble definert som gjennomsnittet pluss to standardavvik for en gruppe på 20 normale barn, 0,022 for IgA (gjennomsnitt = 0,0065, SD = 0,0076) og 0,103 For IgG (gjennomsnitt = 0,0393, SD = 0,032).jejunal biopsi Jejunal biopsier ble oppnådd ved oral rute ved bruk av pediatrisk Carey kapsel plassert i Vinkelen Av Treitz, og visualisert Ved Røntgen. Slimhinnefragmentene ble montert På Et Milliporefilter med den villøse overflaten vendt opp, og umiddelbart nedsenket i 10% formalinløsning, innebygd i paraffin, farget med hematoksylin-eosin Og periodisk syre Schiff og undersøkt i Henhold Til Metoden Fra Pereira et al. (12). Følgende aspekter ble vurdert for definisjonen av cøliaki mønster: fraværende eller vestigial villi, cuboidal og basophilic epitel overflate inneholdende mange interepitelial lymfocytter (12).

Statistisk analyse

Data ble analysert ved hjelp av statistisk EPI INFO v. 6.0 og SPSS programvare (13). Proporsjoner ble sammenlignet med chi-kvadrat test og midler ble sammenlignet Med Kruskal-Wallis test. Analyse av varians (ANOVA) ble brukt til å sammenligne midler og Scheffé-testen ble brukt til å identifisere gruppene som var ansvarlige for forskjellene. 95% konfidensintervall (95% KI) ble definert for bestemmelse av sensitivitet, spesifisitet og prediktive verdier. Signifikansnivået ble satt til 5%.

for beregning av prediktive verdier ble hypotetiske forekomster på 1:500, 1:1000 og 1:2000 brukt basert på litteraturdata fra andre land (14-17).

Resultater

Antigliadin antistoffer

Antigliadin iga antistoffer ble påvist hos 21 av 22 pasienter med cøliaki, noe som resulterte i en følsomhet på 95,5% (95% KI: 75,1 til 99,8%). Spesifisitet var 88,5% ved vurdering av pasienter fra den andre enteropati-gruppen, siden 7 av 61 pasienter presenterte positive antigliadin iga-antistoffer. Når disse antistoffene ble evaluert i kontrollgruppen, var bare 2 av 46 pasienter positive, med en spesifisitet på 95,7% (95% KI: 84,0 til 99,2%). Når de andre enteropati-og kontrollgruppene ble vurdert samlet, var 9 av de 107 pasientene positive for antigliadin iga-antistoffer, med en total spesifisitet på 91,6%.Antigliadin IgG-antistoffer var positive hos 20 av 22 pasienter med cøliaki, noe som resulterte i en sensitivitet på 90,9% (95% KI: 69,4 til 98,4%). Spesifisiteten var 82% ved vurdering av pasienter fra den andre enteropati-gruppen, siden 11 av 61 pasienter presenterte positiv antigliadin IgG. Når disse antistoffene ble evaluert i kontrollgruppen, var bare en av 46 pasienter positiv, noe som resulterte i en spesifisitet på 97,8% (95% KI: 87,0 til 99,9%). Til sammen hadde 12 av de 107 pasientene som utgjorde de andre enteropati-og kontrollgruppene positiv antigliadin IgG, med en total spesifisitet på 88%.

absorbansverdiene for antigliadin IgG og iga er vist I Tabell 2. En signifikant forskjell ble observert i gjennomsnittlige absorbansverdier registrert for de tre studiegruppene for IGA (Figur 1) og IgG (Figur 2) ved BRUK AV ANOVA. Ved Hjelp Av Scheffé-testen ble forskjellen tilskrevet forskjellene mellom kontrollgruppen og andre enteropati-og cøliaki-grupper versus kontroll. Ingen forskjell ble observert mellom de andre enteropati-og kontrollgruppene.Prediktive positive og negative verdier ble beregnet med tanke på hypotetiske verdier for forekomst av cøliaki fra 1:500 til 1: 2000 liveborns. De positive prediktive verdiene var svært lave, fra 8,5 til 2,3% og fra 4,8 til 1,1% For Henholdsvis IgG og Iga. Men en høy negativ prediktiv verdi på 99.9% Ble funnet For IgG og Iga (Tabell 3).

figur 2. ELISA absorbansverdier av antigliadin iga antistoffer i cøliaki (CD, N = 22), kontroll (CO, N = 46) og andre enteropati (OE, N = 61) grupper. Den stiplede linjen representerer cutoff-verdien. De faste linjene representerer gjennomsnittet av absorbansverdiene for hver gruppe.

Diskusjon

hovedmålet med denne studien var å evaluere nytten av antigliadin antistoff kvantifisering i screening for jejunal biopsi indikasjon under undersøkelsen av årsakene til enteropatier og lav vekst, spesielt hos de barn med ambient enteropatier.

i løpet av de siste to tiårene har bestemmelse av serumantistoffer vist seg å være et nyttig verktøy for diagnostisering og oppfølging av pasienter på glutenfri diett (2,3,18-21). Likevel refererer de fleste studiene til populasjoner fra utviklede land, og reiser spørsmål om bruken av disse testene i ikke-utviklede land, hvor høyfrekvensen av såkalte omgivende enteropatier kan gi falske positive resultater for antigliadin antistoffer (10).

i denne studien ble høy følsomhet for igg og iga antigliadin antistoffbestemmelse, henholdsvis 90,9 og 95,5%, observert hos barn utsatt for jejunal biopsi på grunnlag av rutinemessige kliniske indikasjoner, med typiske patologiske funn av cøliaki.To andre tester representerer alternative serologiske verktøy for cøliaki diagnostisk screening test. Bestemmelsen av anti-endomysium antistoffer (22-24) og anti-vev transglutaminase (25,26), både presentere høy følsomhet og spesifisitet, krever mer grundige studier for å etablere sin nytte i utviklingsland. Grodzinski (27) foreslår at antigliadin antistoffer skal brukes som en screeningstest og anti-endomysium antistoffer som en bekreftende test før tarmbiopsi. Imidlertid har flere etterforskere påpekt muligheten for falsk-negativ antistoffdeteksjon (9,28,29). Fordelene ved deteksjon av antigliadin-antistoffer er muligheten FOR ELISA-teknikken og den lave prisen.

Khoshoo et al. (30), i India, rapporterte At IgG og iga antigliadin antistoffer var signifikant høyere hos barn med cøliaki enn hos barn med andre enteropatier.

I Brasil ble antigliadin-antistoffer undersøkt hos barn med cøliaki, som viste en sensitivitet på 90,4% For IgG og 64,2% for Iga og en spesifisitet på 87.0% For IgG og 92,1% for IgA. Forfatterne mener at de positive antistoffene assosiert med de karakteristiske histologiske funnene bekrefter diagnosen cøliaki. Imidlertid ble et lite antall pasienter testet For IgA Av Medeiros (31): 14 av 29 pasienter med cøliaki, 49 av 106 med andre enteropatier, 27 av 45 med langvarig diare og 26 av 56 kontrollpasienter.

Mange studier har brukt grupper av voksne som kontroll, noen av dem uten jejunalbiopsi (4,32-36). Generelt har antigliadin iga vist seg å være mer spesifikk for cøliaki. Tucker et al. (36) observert en høyere spesifisitet For IgG, i samsvar med dagens resultater.selv om frekvensen av cøliaki i vårt land ikke er estimert, tillater de hypotetiske verdiene oss å konkludere med at hvis et barn ikke har IgG og Ingen iga antigliadin antistoffer, har han en 99,9% sjanse for ikke å ha cøliaki, uten å måtte bli sendt til en jejunal biopsi.

1. McNeish AS & Anderson CM (1974). Cøliaki; lidelsen i barndommen. Klinisk Gastroenterologi, 3: 127-144.

2. Kilander AF, Nilsson LA & Gillberg R (1987). Serum antibodies to gliadin in coeliac disease after gluten withdrawal. Scandinavian Journal of Gastroenterology, 22: 29-34.

3. Stenhammar L, Kilander AF, Nilsson LA, Stromberg L & Tarkowski A (1984). Serum gliadin antibodies for detection and control of childhood coeliac disease. Acta Paediatrica Scandinavica, 73: 657-663.

4. Volta U, Lenzi M, Lazzari R, Cassani F, Collina A, Bianchi FB & Pisi E (1985). Antistoffer mot gliadin påvist ved immunfluorescens og en mikro-ELISA-metode: markører for aktiv barndom og voksen cøliaki. Gut, 26: 667-671.

5. Lindberg T, Nilsson LA, Borulf S, Cavell B, Fallstrom Sp, Jansson U, Stenhammar ls & Stintzing G (1985). Serum iga og IgG gliadin antistoffer og skade på tynntarmslimhinnen hos barn. Tidsskrift For Pediatrisk Gastroenterologi og Ernæring, 4: 917-922.

6. Stahlberg MR, Savilahti e & Viander M (1986). Antistoffer mot gliadin AV ELISA som en screeningstest for barndoms cøliaki. Tidsskrift For Pediatrisk Gastroenterologi og Ernæring, 5: 726-729.

7. Vitoria JC, Arrieta A, Astigarraga i, Garcia-Masdevall d &Rodriguez-Soriano J (1994). Bruk av serologiske markører som en screeningstest hos familiemedlemmer til pasienter med cøliaki. Tidsskrift For Pediatrisk Gastroenterologi og Ernæring, 19: 304-309.

8. Altuntas B, Kansu A, Ensari a & Girgin N (1998). Cøliaki hos tyrkiske kortvokste barn og verdien av antigliadin antistoff i diagnose. Acta Paediatrica Japonica, 40: 457-460.

9. Chartrand LJ, Agulnik J, Vanounou T, Russo PA, Baehler p & Seidman EG (1997). Effektivitet av antigliadin antistoffer som en screening test for cøliaki hos barn. Canadian Medical Association Journal, 157: 527-533.

10. Walker-Smith JA, Guandalini S, Schmitz J, Shmerling dh & Visakorpi JK (1990). Reviderte kriterier for diagnostisering av cøliaki. Arkiv Av Sykdom I Barndommen, 65: 909-911.

11. Huff JC, Weston wl & Zirer DK (1979). Hvete protein antistoffer i dermatitis herpetiformis. Journal Of Investigative Dermatology, 73: 570-574.

12. Pereira DR, Weinstein wm & Rubin CE (1975). Symposium på patologi i mage-tarmkanalen. Del II. Liten tarmbiopsi. Menneskelig Patologi, 6: 157-217.

13. Dean AG, Dean JA, Coulombier D, Bremde KA, Smith DC, Burton AH, Dicker RC, Sullivan K, Fagan RF & Arner TG (1994). Epi Info, Versjon 6: En Tekstbehandling, Database Og Statistikk Program For Epidemiologi På Mikrodatamaskiner. Senter For Sykdomskontroll Og Forebygging, Atlanta, GA.

14. Mylotte S, Egan Mitchell b, McCarthy CF & McNicholl B (1973). Forekomst av cøliaki I Vest-Irland. British Medical Journal, 1: 703-705.

15. Rossipal E (1975). Forekomst av cøliaki hos Barn I Østerrike. Zeitschrift fü Kinderheilkunde, 119: 143-149.

16. Hed J, Lieden G, Ottosson E, Strô M, Walan A, Groth O, Sjô f & Franzen L (1984). Iga antigliadin antistoffer og jejunale slimhinnelesjoner hos friske blodgivere. Lancet, 2: 215.

17. Stevens FM, Egan-Mitchell b, Cryan E, McCarthy cf & McNicholl B (1987). Redusert forekomst av cøliaki. Arkiv Av Sykdom I Barndommen, 62: 465-468.

18. Kilander AF, Dotevall G, Fallstrom SP, Gillberg RE, Nilsson la & Tarkowski A (1983). Evaluering av gliadin antistoffer for påvisning av cøliaki. Skandinavisk Tidsskrift For Gastroenterologi, 18: 377-383.

19. Sbolgi P, Mangiante G, Ruffa G, Caprioli F, Bartolozzi G, Cinigolani m & Gemme G (1991). Gli anticorpi antigliadina nella diagnose og oppfølging av malattia celiaca. Minerva Pediatri, 43: 783-788.

20. Bodé S, Weile B, Krasilnikoff pa & Gudmand-Hoyer E (1993). Den diagnostiske verdien av gliadin antistofftesten i cøliaki hos barn: en prospektiv studie. Tidsskrift For Pediatrisk Gastroenterologi og Ernæring, 17: 260-264.

21. Carroccio A, Iacono G, Montalto G, Cavataio F, Soresi M, Kazmierska i & Notarbartolo A (1993). Immunologiske og absorberende tester i cøliaki: kan de erstatte tarmbiopsier? Skandinavisk Tidsskrift For Gastroenterologi, 28: 673-676.

22. Burgin-Wolff A, Blikk H, Hadziselimovic F, Huber H, Lentze Mj, Nusslé D & Reymond-Berthet C (1991). Antigliadin og antiendomysium antistoffbestemmelse for cøliaki. Arkiv Av Sykdom I Barndommen, 66: 941-947.

23. Lerner A, Kumar V & Iancu TC (1994). Immunological diagnosis of childhood coeliac disease: comparison between antigliadin, antireticulin and antiendomysial antibodies. Clinical and Experimental Immunology, 95: 78-82.

24. Lindquist BL, Rogoziniski T, Moi H, Danielsson D & Olcên P (1994). Endomysium and gliadin IgA antibodies in children with coeliac disease. Scandinavian Journal of Gastroenterology, 29: 452-456.

25. Dieterich W, Ehnis T, Bauer M, Donner P, Volta U, Riecken EO & Schuppan D (1997). Identifikasjon av vevstransglutaminase som autoantigen av cøliaki. Naturmedisin, 3: 797-801.

26. Dieterich W, Laag E, Schô H, Volta U, Fergunson A, Gillet H, Riecken eo & Schuppan D (1998). Autoantistoffer mot vevstransglutaminase som prediktorer for cøliaki. Gastroenterologi, 115: 1317-1321.

27. Grodzinsky E (1996). Screening for cøliaki hos tilsynelatende friske blodgivere. Acta Pediatrica, 412 (Suppl): 36-38.

28. Rostami AM, Sater RA, Bird SJ, Galetta S, Farber RE, Kamoun M, Silberg DH, Grossman RI & Pfohl D (1999). A double-blind, placebo-controlled trial of extracorporeal photopheresis chronic progressive multiple sclerosis. Multiple Sclerosis, 5: 198-203.

29. Altuntas B, Gul H, Yarali N & Ertan U (1999). Etiology of chronic diarrhea. Indian Journal of Pediatrics, 66: 657-661.

30. Khoshoo V, Bhan MK, Puri S, Jain R, Jayashree S, Bhatnagar RS, Kumar R & Stintzing G (1989). Serum antigliadin antistoffprofil i barndommen langvarig diare på grunn av cøliaki og andre årsaker i et utviklingsland. Skandinavisk Tidsskrift For Gastroenterologi, 24: 1212-1216.

31. Medeiros EHGR (1992). Anticorpo s ④rico antigliadina ingen diagnoseó og seguimento da doen hryvnja celí. Doktoravhandling, Escola Paulista De Medicina, Sã Paulo, SP, Brasil.

32. Taylor KB, Truelove SC, Thompson dl & Wright R (1961). En immunologisk studie av cøliaki og idiopatisk steatorrhoea; serologiske reaksjoner på gluten og melkeproteiner. British Medical Journal, 2: 1727-1731.

33. Walia BNS, Sidhu JK, Tandon BN, Ghai AP & Bhargava S (1966). Cøliaki hos Nordindiske barn. British Medical Journal, 2: 1233-1234.

34. Burgin-Wolff a, Bertele RM, Berger R, Blikk H, Harms HK, Bare M, Khanna S, Schurmann K, Signerer e & Tomovic D (1983). En pålitelig screening test for barndom cøliaki: fluorescerende immunosorbent test for gliadin antistoffer; en prospektiv multisenter studie. Tidsskrift For Pediatri, 102: 655-660.

35. Husby S, Foged N, Oxelius VA & Svehag SE (1986). Serum IgG-underklasse antistoffer mot gliadin og andre kostantigener hos barn med cøliaki. Klinisk Og Eksperimentell Immunologi, 64: 526-535.

36. Tucker NT, Barghuthy FS, Prihoda TJ, Kumar V, Lerner a & Lebenthal E (1988). Antigliadin antistoffer påvist ved enzymbundet immunosorbentanalyse som en markør for barndoms cøliaki. Tidsskrift For Pediatri, 113: 286-289.

Takk

Vi er takknemlige for de Ansatte I Pediatrisk Gastroenterologi Service, Universitetssykehus, Federal University Of Minas Gerais, for å henvise pasientene og til de ansatte I Centro De Pesquisas René Rachou for teknisk assistanse.