Serum antigliadin antikroppsnivåer som ett screeningkriterium före jejunal biopsi indikation för celiaki i ett utvecklingsland
Braz J med Biol Res, November 2001, volym 34(11) 1415-1420
Serum antigliadin antikroppsnivåer som ett screeningkriterium före jejunal biopsi indikation för celiaki i ett utvecklingsland
M. Bahia1, A. Rabello2, G. Brasileiro filho3 och F. J. Penna1
1servi Ubico av gastroenterologi pediatrisk, Institutionen för pediatrik, Faculdade de Medicina, Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, MG, Brasilien
2Centro de Pesquisas ren Ubic Rachou, Belo Horizonte, MG, Brasilien
3Departamento de Anatomia patol Ubicgica, Faculdade de Medicina, Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, MG, Brasilien
Abstrakt
Abstract 
syftet med den aktuella studien var att bestämma effekten av detektion av antigliadin immunoglobuliner G och A (IgG och Iga) för diagnos av celiaki i ett utvecklingsland, eftersom andra enteropatier kan förändra nivåerna av dessa antikroppar. Tre grupper studerades: 22 patienter med celiaki (medelålder: 30.6 månader), 61 patienter med andra enteropatier (medelålder: 43,3 månader) och 46 patienter utan enteropatier (medelålder: 96,9 månader). Antigliadin IgG och IGA ELISA visade känslighet på 90,9 respektive 95,5%. Med de hypotetiska värdena för prevalens som sträcker sig från 1:500 till 1:2000 liveborns varierade det positiva prediktiva värdet från 8,5 till 2,3% för IgG och från 4,8 till 1,1% för iga. Med tanke på patienterna utan enteropatier var specificiteten 97,8 respektive 95,7% för IgG respektive IgA. Hos patienter med andra enteropatier var specificiteten 82,0 respektive 84,1%. När patienter med och utan andra enteropatier betraktades som helhet var specificiteten 88,8 respektive 91,6%. Specificiteten hos positiv IgG eller IgA var 93,5% hos barn utan enteropatier och 78,7% i närvaro av andra enteropatier. Det negativa prediktiva värdet för hypotetiska prevalenser som varierade från 1:500 till 1:2000 liveborns var 99,9%. Således, även i utvecklingsländer där förekomsten av icke-celiac enteropatier är hög, är bestämningen av serum antigliadin antikroppsnivåer ett användbart screeningtest före jejunalbiopsi vid undersökning av intestinal malabsorption.
nyckelord: celiaki, enteropatier, antigliadin antikroppar
introduktion
för närvarande kräver kriterierna för diagnos av celiaki demonstration av typiska förändringar i tunntarmsbiopsi (jejunal) följt av klinisk förbättring på en glutenfri diet. Enligt fastställda kriterier för bekräftelse av diagnosen celiaki behövs tre på varandra följande tarmbiopsier (1). Denna invasiva procedur kräver utbildad personal och är obehaglig för patienter. Dessutom är den totala tidsperioden för den diagnostiska undersökningen mer än två år.
värdefull erfarenhet har erhållits med kvantifiering av antigliadinantikroppar som en ytterligare diagnostisk metod i flera utvecklade länder (2-9). Denna metod hjälper till att förhindra brist på upptäckt av fall av celiaki och också för att undvika många onödiga jejunalbiopsier. Trots viktiga framsteg i de immunologiska metoderna för diagnos av celiaki, kan den höga förekomsten av icke-celiac enteropatier, som kan inducera syntesen av antigliadinantikroppar, begränsa deras genomförbarhet i utvecklingsländer (10). Följaktligen finns det kontroverser om användbarheten av antikroppsdetektering i utvecklingsländer.syftet med den aktuella studien var att bedöma profilen och bestämma känsligheten och specificiteten hos den enzymbundna immunosorbentanalysen (ELISA) för bestämning av antigliadin immunoglobuliner G och a (IgG och IgA) antikroppar hos brasilianska barn med celiaki, med andra enteropatier och utan gastrointestinala symtom.
patienter och metoder
patienter
under perioden 1991-96 valdes tre studiegrupper vid gastroenterologiska kliniker vid Universitetssjukhuset, Federal University of Minas Gerais. Grupperna bestod av barn med en klinisk bild som tyder på intestinal malabsorption såsom kroniska gastroenterologiska symtom eller låg statur (under 3: e percentilen), som skickades till jejunalbiopsi och blodprovtagning som en del av den rutinmässiga kliniska utvärderingen. Informerat samtycke att delta i denna forskning erhölls från barnens föräldrar. Projektet godkändes av Forskningsetikutskottet vid Federal University of Minas Gerais.
studiegrupper
Celiac sjukdom grupp. Tjugotvå patienter med intestinal malabsorption, som uppvisar svår jejunal villös atrofi och kuboidal epitelyta med många intraepiteliala lymfocyter.
annan enteropatigrupp. Sextio patienter med gastroenterologiska symtom som bukdistension eller smärta eller kronisk diarre, med normala eller ospecifika förändringar i tarmslimhinnan.
kontrollgrupp. Fyrtiosex patienter underkastade utvärdering av låg statur, utan hormonella eller gastroenterologiska symtom och med en normal jejunalbiopsi.
den allmänna beskrivningen av patienterna presenteras i Tabell 1. Medelåldern och följaktligen vikten och höjden var högre i kontrollgruppen än i de andra grupperna som ingick i studien för etiologisk diagnos av låg statur, vanligtvis definierad efter tre års ålder.
metoder
antigliadin IgG och Iga detektion. Serum erhållet genom centrifugering från 5 ml blod från varje patient lagrades vid-20oC tills användning. ELISA för antigliadin antikroppsdetektering utfördes med metoden för Huff et al. (11), med små ändringar. I korthet belades ELISA-plattor med 100 CGL per brunn på 50 CGG / ml rå gliadin (Sigma, St.Louis, MO, USA) i karbonatbuffert vid 4oC i 12 timmar och blockerades med 150 CGL per brunn med 2% bovint albumin i PBS vid 37oC i 60 min. Sera (100 occl per brunn) utspädd 1:100 (för iga-detektion) eller 1:500 (för IgG-detektion) lämnades sedan att stå vid 37oC i 60 min i två exemplar enligt ett plattprotokoll som inkluderade positiva och negativa kontroller. Hundra mikroliter per brunn av peroxidas-länkad anti-human IgG eller iga-antikropp (Sigma) tillsattes sedan och plattorna inkuberades vid 37oC i 60 min. Färgutveckling uppnåddes med användning av 100 CGL per brunn ABTS(2,2 ’ -azinobis (3-etylbenstiazolin-6-sulfonsyra); Sigma). Reaktionen avbröts efter 10 min med 10% SDS (Sigma) och absorbans lästes vid 405 nm med användning av en ELISA-läsare. Efter vart och ett av de ovan beskrivna stegen tvättades plattorna fem gånger med PBS innehållande 5% Tween 20. Cutoff-punkten definierades som medelvärdet plus två standardavvikelser för en grupp på 20 normala barn, var 0,022 för IgA (medelvärde = 0,0065, SD = 0,0076) och 0,103 för IgG (medelvärde = 0,0393, SD = 0,032).
Jejunalbiopsi
Jejunalbiopsier erhölls genom oral väg med användning av den pediatriska Carey-kapseln placerad i vinkeln på Treitz och visualiserades med röntgen. Slemhinnefragmenten monterades på ett Milliporfilter med den villösa ytan uppåt och nedsänktes omedelbart i 10% formalinlösning, inbäddad i paraffin, färgad med hematoxylin-eosin och periodisk syra Schiff och undersöktes enligt metoden för Pereira et al. (12). Följande aspekter beaktades för definitionen av celiac mönster: frånvarande eller vestigial villi, kuboid och basofil epitelyta innehållande många interepiteliala lymfocyter (12).
statistisk analys
Data analyserades med hjälp av statistisk EPI INFO V. 6.0 och SPSS-programvara (13). Proportionerna jämfördes med chi-square-testet och medel jämfördes med Kruskal-Wallis-testet. Variansanalys (ANOVA) användes för att jämföra medel och Scheff-testet för att identifiera de grupper som ansvarar för skillnaderna. 95% konfidensintervall (95% CI) definierades för bestämningar av känslighet, specificitet och prediktiva värden. Nivån av betydelse fastställdes till 5%.
för beräkning av prediktiva värden användes hypotetiska incidenter av 1:500, 1:1000 och 1:2000 baserat på litteraturdata från andra länder (14-17).
resultat
antigliadinantikroppar
Antigliadin IgA-antikroppar detekterades hos 21 av 22 patienter med celiaki, vilket resulterade i en känslighet på 95,5% (95% CI: 75,1 till 99,8%). Specificiteten var 88, 5% när man övervägde patienter från den andra enteropatigruppen, eftersom 7 av 61 patienter uppvisade positiva antigliadin IgA-antikroppar. När dessa antikroppar utvärderades i kontrollgruppen var endast 2 av 46 patienter positiva, med en specificitet på 95, 7% (95% CI: 84, 0 till 99, 2%). När de andra enteropati-och kontrollgrupperna övervägdes tillsammans var 9 av de 107 patienterna positiva för antigliadin IgA-antikroppar, med en total specificitet på 91, 6%.
Antigliadin IgG-antikroppar var positiva hos 20 av 22 patienter med celiaki, vilket resulterade i en känslighet på 90, 9% (95% CI: 69, 4 till 98, 4%). Specificiteten var 82% när man övervägde patienter från den andra enteropatigruppen, eftersom 11 av 61 patienter uppvisade positiv antigliadin IGG. När dessa antikroppar utvärderades i kontrollgruppen var endast en av 46 patienter positiv, vilket resulterade i en specificitet på 97,8% (95% CI: 87,0 till 99,9%). Sammantaget hade 12 av de 107 patienterna som omfattade de andra enteropati-och kontrollgrupperna positiv antigliadin IgG, med en total specificitet på 88%.
absorbansvärdena för antigliadin IgG och IgA visas i Tabell 2. En signifikant skillnad observerades i de genomsnittliga absorbansvärdena som registrerades för de tre studiegrupperna för iga (Figur 1) och IgG (Figur 2) med ANOVA. Med hjälp av Scheff Jacobi-testet tillskrevs skillnaden skillnaderna mellan kontrollgruppen och andra enteropati-och celiacsjukdomsgrupper kontra kontroll. Ingen skillnad observerades mellan de andra enteropatierna och kontrollgrupperna.
prediktiva positiva och negativa värden beräknades med tanke på hypotetiska värden för förekomst av celiaki som sträcker sig från 1:500 till 1:2000 liveborns. De positiva prediktiva värdena var mycket låga, allt från 8,5 till 2,3% och från 4,8 till 1,1% för IgG respektive IgA. Men ett högt negativt prediktivt värde på 99.9% hittades för IgG och IgA (tabell 3).
|
|
Figur 1. ELISA absorbansvärden för antigliadin IgG-antikroppar i celiaki (CD, N = 22), kontroll (CO, N = 46) och andra enteropatigrupper (OE, N = 61). Den streckade linjen representerar cutoff-värdet. De heldragna linjerna representerar medelvärdet av absorbansvärdena för varje grupp. |
|
|
figur 2. ELISA-absorbansvärden för antigliadin IgA-antikroppar i celiaki (CD, N = 22), kontroll (CO, N = 46) och andra enteropatigrupper (OE, N = 61). Den streckade linjen representerar cutoff-värdet. De heldragna linjerna representerar medelvärdet av absorbansvärdena för varje grupp. |
diskussion
huvudsyftet med denna studie var att utvärdera användbarheten av antigliadin antikroppskvantitation vid screening för jejunalbiopsiindikation under undersökningen av orsakerna till enteropatier och låg statur, särskilt hos de barn med omgivande enteropatier.
under de senaste två decennierna har bestämningen av serumantikroppar visat sig vara ett användbart verktyg för diagnos och uppföljning av patienter på en glutenfri diet (2,3,18-21). Ändå hänvisar de flesta studierna till populationer från utvecklade länder, vilket väcker frågor om nyttan av dessa tester i icke-utvecklade länder, där högfrekvensen av så kallade omgivande enteropatier kan ge falskt positiva resultat för antigliadinantikroppar (10).
i den aktuella studien observerades hög känslighet för IgG-och IgA-antigliadin-antikroppsbestämning, 90,9 respektive 95,5%, hos barn som utsattes för jejunalbiopsi på grundval av rutinmässiga kliniska indikationer, med typiska patologiska fynd av celiaki.
två andra tester representerar alternativa serologiska verktyg för det diagnostiska screeningtestet för celiaki. Bestämningen av anti-endomysiumantikroppar (22-24) och anti-vävnadstransglutaminas (25,26), som båda uppvisar hög känslighet och specificitet, kräver mer djupgående studier för att fastställa dess användbarhet i utvecklingsländer. Grodzinski (27) föreslår att antigliadinantikroppar ska användas som ett screeningtest och anti-endomysiumantikropparna som ett bekräftande test före tarmbiopsin. Flera utredare har dock påpekat möjligheten till falskt negativ antikroppsdetektering (9,28,29). Fördelarna med detektering av antigliadinantikroppar är genomförbarheten av ELISA-tekniken och den låga kostnaden.
Khoshoo et al. (30), i Indien, rapporterade att IgG och Iga antigliadinantikroppar var signifikant högre hos barn med celiaki än hos barn med andra enteropatier.
i Brasilien undersöktes antigliadinantikroppar hos barn med celiaki, vilket visade en känslighet på 90, 4% för IgG och 64, 2% för IgA och en specificitet på 87.0% för IgG och 92,1% för IgA. Författarna anser att de positiva antikropparna associerade med de karakteristiska histologiska fynden bekräftar diagnosen celiaki. Ett litet antal patienter testades emellertid för Iga av Medeiros (31): 14 av 29 patienter med celiaki, 49 av 106 med andra enteropatier, 27 av 45 med långvarig diarre och 26 av 56 kontrollpatienter.
många studier har använt grupper av vuxna som kontroll, några av dem utan jejunalbiopsi (4,32-36). I allmänhet har antigliadin IgA visat sig vara mer specifik för celiaki. Tucker et al. (36) observerade en högre specificitet för IgG, i överensstämmelse med nuvarande resultat.
även om frekvensen av celiaki i vårt land inte har uppskattats, tillåter de hypotetiska värdena oss att dra slutsatsen att om ett barn inte har några IgG och inga iga antigliadin-antikroppar har han 99,9% chans att inte ha celiaki, utan att behöva underkastas en jejunalbiopsi.
1. McNeish som & Anderson CM (1974). Celiac sjukdom; störningen i barndomen. Klinisk Gastroenterologi, 3: 127-144.
2. Kilander AF, Nilsson LA & Gillberg R (1987). Serum antibodies to gliadin in coeliac disease after gluten withdrawal. Scandinavian Journal of Gastroenterology, 22: 29-34.
3. Stenhammar L, Kilander AF, Nilsson LA, Stromberg L & Tarkowski A (1984). Serum gliadin antibodies for detection and control of childhood coeliac disease. Acta Paediatrica Scandinavica, 73: 657-663.
4. Volta U, Lenzi M, Lazzari R, Cassani F, Collina A, Bianchi FB & Pisi E (1985). Antikroppar mot gliadin detekteras genom immunofluorescens och en mikroelisa-metod: markörer för aktiv barndom och vuxen celiac sjukdom. Tarm, 26: 667-671.
5. Lindberg T, Nilsson LA, Borulf S, Cavell B, Fallström SP, Jansson U, Stenhammar LS & Stintzing G (1985). Serum IgA-och IgG gliadin-antikroppar och skador på tunntarmen hos barn. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition, 4: 917-922.
6. Stahlberg MR, Savilahti e & Viander M (1986). Antikroppar mot gliadin av ELISA som ett screeningtest för celiaki i barndomen. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition, 5: 726-729.
7. Vitoria JC, Arrieta A, Astigarraga I, Garcia-Masdevall D & Rodriguez-Soriano J (1994). Användning av serologiska markörer som screeningtest hos familjemedlemmar till patienter med celiaki. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition, 19: 304-309.
8. Altuntas B, Kansu A, Ensari a & Girgin N (1998). Celiac sjukdom hos Turkiska kortstatus barn och värdet av antigliadinantikropp vid diagnos. Acta Paediatrica Japonica, 40: 457-460.
9. Chartrand LJ, Agulnik J, Vanounou T, Russo PA, Baehler P & Seidman EG (1997). Effektivitet av antigliadinantikroppar som ett screeningtest för celiaki hos barn. Canadian Medical Association Journal, 157: 527-533.
10. Walker-Smith JA, Guandalini S, Schmitz J, Shmerling DH & Visakorpi JK (1990). Reviderade kriterier för diagnos av celiaki. Arkiv av sjukdom i barndomen, 65: 909-911.
11. Huff JC, Weston WL & Zirker DK (1979). Veteproteinantikroppar i dermatit herpetiformis. Journal of Investigative Dermatology, 73: 570-574.
12. Pereira DR, Weinstein WM & Rubin CE (1975). Symposium om patologi i mag-tarmkanalen. Del II. tunntarmsbiopsi. Mänsklig Patologi, 6: 157-217.
13. Dean AG, Dean JA, Coulombier D, Bremde KA, Smith DC, Burton AH, Dicker RC, Sullivan K, Fagan RF & Arner TG (1994). Epi Info, Version 6: Ett ordbehandlings -, databas-och statistikprogram för epidemiologi på mikrodatorer. Centra för sjukdomskontroll och förebyggande, Atlanta, GA.
14. Mylotte S, Egan Mitchell B, McCarthy CF & McNicholl B (1973). Förekomst av celiaki i västra Irland. British Medical Journal, 1: 703-705.
15. Rossipal E (1975). Förekomst av celiaki hos barn i Österrike. Zeitschrift f kubr Kinderheilkunde, 119: 143-149.
16. Hed J, Lieden G, Ottosson E, Strcjirm M, Walan a, Groth O, Sjcjirgren f & Franzen L (1984). Iga antigliadin antikroppar och jejunal slemhinneskador hos friska blodgivare. Lancet, 2: 215.
17. Stevens FM, Egan-Mitchell B, Cryan E, McCarthy CF & McNicholl B (1987). Minskande förekomst av celiaki. Arkiv av sjukdom i barndomen, 62: 465-468.
18. Kilander AF, Dotevall G, Fallström SP, Gillberg RE, Nilsson LA & Tarkowski A (1983). Utvärdering av gliadinantikroppar för detektion av celiaki. Scandinavian Journal of Gastroenterology, 18: 377-383.
19. Sbolgi P, Mangiante G, Ruffa G, Caprioli F, Bartolozzi G, Cinigolani M & Gemme G (1991). Det finns många olika typer av problem. Minerva Pediatric, 43: 783-788.
20. Bodi s, Weile B, Krasilnikoff PA & Gudmand-Hoyer E (1993). Det diagnostiska värdet av gliadin-antikroppstestet vid celiaki hos barn: en prospektiv studie. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition, 17: 260-264.
21. Carroccio A, Iacono G, Montalto G, Cavataio F, Soresi M, Kazmierska I & Notarbartolo A (1993). Immunologiska och absorberande tester vid celiaki: kan de ersätta tarmbiopsier? Scandinavian Journal of Gastroenterology, 28: 673-676.
22. Burgin-Wolff A, Blick H, Hadziselimovic F, Huber H, Lentze MJ, Nussl oc D & Reymond-Berthet C (1991). Antigliadin och antiendomysium antikroppsbestämning för celiaki. Arkiv av sjukdom i barndomen, 66: 941-947.
23. Lerner A, Kumar V & Iancu TC (1994). Immunological diagnosis of childhood coeliac disease: comparison between antigliadin, antireticulin and antiendomysial antibodies. Clinical and Experimental Immunology, 95: 78-82.
24. Lindquist BL, Rogoziniski T, Moi H, Danielsson D & Olcên P (1994). Endomysium and gliadin IgA antibodies in children with coeliac disease. Scandinavian Journal of Gastroenterology, 29: 452-456.
25. Dieterich W, Ehnis T, Bauer M, Donner P, Volta U, Riecken EO & Schuppan D (1997). Identifiering av vävnadstransglutaminas som autoantigen av celiaki. Naturmedicin, 3: 797-801.
26. Dieterich W, Laag E, Schabipp H, Volta U, Fergunson A, Gillet H, Riecken eo & Schuppan D (1998). Autoantikroppar mot vävnadstransglutaminas som prediktorer för celiaki. Gastroenterologi, 115: 1317-1321.
27. Grodzinsky E (1996). Screening för celiaki hos uppenbarligen friska blodgivare. Acta Pediatrica, 412 (Suppl): 36-38.
28. Rostami AM, Sater RA, Bird SJ, Galetta S, Farber RE, Kamoun M, Silberg DH, Grossman RI & Pfohl D (1999). A double-blind, placebo-controlled trial of extracorporeal photopheresis chronic progressive multiple sclerosis. Multiple Sclerosis, 5: 198-203.
29. Altuntas B, Gul H, Yarali N & Ertan U (1999). Etiology of chronic diarrhea. Indian Journal of Pediatrics, 66: 657-661.
30. Khoshoo V, Bhan MK, Puri S, Jain R, Jayashree S, Bhatnagar RS, Kumar R & Stintzing G (1989). Serum antigliadin antikroppsprofil i barndomen långvarig diarre på grund av celiaki och andra orsaker i ett utvecklingsland. Scandinavian Journal of Gastroenterology, 24: 1212-1216.
31. Medeiros EHGR (1992). Anticorpo s sacrico antigliadina ingen diagnos sacristico e seguimento da doen sacrica. Doktorsavhandling, Escola Paulista de Medicina, s Bijo Paulo, SP, Brasilien.
32. Taylor KB, Truelove SC, Thompson DL & Wright R (1961). En immunologisk studie av celiaki och idiopatisk steatorrhoea; serologiska reaktioner på gluten och mjölkproteiner. British Medical Journal, 2: 1727-1731.
33. Walia BNS, Sidhu JK, Tandon BN, Ghai AP & Bhargava S (1966). Celiaki hos nordindiska barn. British Medical Journal, 2: 1233-1234.
34. Burgin-Wolff A, Bertele RM, Berger R, blick H, skadar HK, bara M, Khanna s, Schurmann K, Signerare e & Tomovic D (1983). Ett pålitligt screeningtest för celiac sjukdom i barndomen: fluorescerande immunosorbent test för gliadin antikroppar; en prospektiv multicenterstudie. Journal of Pediatrics, 102: 655-660.
35. Husby S, fogad N, Oxelius VA & Svehag SE (1986). Serum IGG-underklassantikroppar mot gliadin och andra dietantigener hos barn med celiaki. Klinisk och experimentell immunologi, 64: 526-535.
36. Tucker NT, Barghuthy FS, Prihoda TJ, Kumar V, Lerner a & Lebenthal E (1988). Antigliadinantikroppar detekterade genom enzymbunden immunosorbentanalys som en markör för celiac sjukdom i barndomen. Journal of Pediatrics, 113: 286-289.
erkännanden
Vi är tacksamma för personalen på Pediatric Gastroenterology Service, Universitetssjukhuset, Federal University of Minas Gerais, för att hänvisa patienterna och till personalen på Centro de Pesquisas ren Michail Rachou för teknisk hjälp.
Leave a Reply