PGD je forma genetické diagnostiky prováděné před implantací. To znamená, že oocyty pacienta by měly být oplodněny in vitro a embrya udržována v kultuře až do stanovení diagnózy. Je také nutné provést biopsii na těchto embryích, aby se získal materiál, na kterém se provede diagnóza. Samotná diagnóza může být provedena pomocí několika technik, v závislosti na povaze studovaného stavu. Obecně se metody založené na PCR používají pro monogenní poruchy a ryby pro chromozomální abnormality a pro sexing těch případů,kdy není k dispozici žádný protokol PCR pro onemocnění spojené s X. Tyto techniky musí být upraveny tak, aby byly prováděny na blastomerech, a musí být před klinickým použitím důkladně testovány na jednobuněčných modelech. Konečně, po embryo výměna, přebytek kvalitní nedotčena embryí může být zmrazen, musí být rozmraženy a převedeny zpět v dalším cyklu.

Získání embryosEdit

v Současné době, všechny PGD embryí jsou získány pomocí asistované reprodukce, i když využívání přírodních cyklů a in vivo oplození následuje děložní výplach byl proveden pokus v minulosti a je nyní z velké části opuštěné. Aby se získala velká skupina oocytů, pacienti podstoupí kontrolovanou stimulaci vaječníků (COH). COH se provádí buď v agonista protokol, pomocí gonadotropin-uvolňující hormon (GnRH), analogy pro hypofyzární desenzibilizace, v kombinaci s lidské menopauzální gonadotropiny (hMG) nebo rekombinantní folikuly stimulující hormon (FSH), nebo antagonista protokolu pomocí rekombinantní FSH v kombinaci s GnRH antagonisty na základě zhodnocení klinického stavu pacienta profil (věk, index tělesné hmotnosti (BMI), endokrinní parametry). hCG se podává, pokud jsou při transvaginálním ultrazvukovém vyšetření pozorovány alespoň tři folikuly o průměrném průměru větším než 17 mm. Transvaginální ultrazvukem řízené získávání oocytů je naplánováno 36 hodin po podání hCG. Suplementace luteální fáze spočívá v denním intravaginálním podání 600 µg přírodního mikronizovaného progesteronu.

Oocyty jsou pečlivě denudated od cumulus buňky, protože tyto buňky mohou být zdrojem kontaminace během PGD, pokud založené na PCR technologie je použita. Ve většině hlášených cyklů se místo IVF používá Intracytoplazmatická injekce spermií (ICSI). Hlavními důvody jsou zabránit kontaminaci zbytkovým spermatem přilnutým k zona pellucida a zabránit neočekávanému selhání oplodnění. Postup ICSI se provádí na zralých oocytech metafáze-II a oplodnění se hodnotí 16-18 hodin po. Vývoj embrya je dále hodnocen každý den před biopsií a až do přenosu do dělohy ženy. Během fáze štěpení se hodnocení embryí provádí denně na základě počtu, velikosti, tvaru buněk a rychlosti fragmentace blastomer. 4. den, embrya byly hodnoceny v závislosti na jejich stupni zhutnění a blastocystě byly hodnoceny podle kvality throphectoderm a vnitřní buněčné hmoty, a stupeň jejich rozšíření.

postupy Biopsieeditovat

protože PGD lze provádět na buňkách z různých vývojových stádií, postupy biopsie se odpovídajícím způsobem liší. Teoreticky může být biopsie provedena ve všech preimplantačních stádiích, ale byly navrženy pouze tři: na neoplodněná a oplodněných oocytů (pro polární těla, PBs), na třetí den štěpení-stádia embryí (blastomer) a na blastocystě (pro trophectoderm buňky).

postup biopsie vždy zahrnuje dva kroky: otevření zona pellucida a odstranění buňky(buněk). Existují různé přístupy k oběma kroky, včetně mechanické, chemické a fyzikální (Tyrode je kyselý roztok) a laserové technologie pro porušení zona pellucida, vytlačování nebo aspirace pro odstranění PBs a blastomer, a herniaci trophectoderm buněk.

Polární tělo biopsyEdit

polar tělo biopsie je odběr vzorků z polárních tělo, které je malé haploidní buňky, který je tvořen současně jako vejce buněk během oogeneze, ale které obecně nemá schopnost být oplodněno. Ve srovnání s biopsií blastocysty může mít biopsie polárního těla potenciálně nižší náklady, méně škodlivé vedlejší účinky a citlivější při detekci abnormalit. Hlavní výhodou použití polárních orgánů v PGD je, že nejsou nezbytné pro úspěšné oplodnění nebo normální embryonální vývoj, a tím zajistit žádné škodlivé účinky na embryo. Jednou z nevýhod PB biopsie je, že poskytuje pouze informace o mateřský příspěvek, aby se embryo, což je důvod, proč případy mateřských zdědil autozomálně dominantních a X-vázaných onemocnění, které jsou výhradně mateřských přenášen může být diagnostikována, a autozomálně recesivní onemocnění může jen částečně být diagnostikována. Další nevýhodou je zvýšené riziko diagnostické chyby, například v důsledku degradace genetického materiálu nebo událostí rekombinace, které vedou k heterozygotním prvním polárním tělům.

Výstřih-fáze biopsie (blastomera biopsie)Upravit

Dekolt-fáze biopsie se obvykle provádí ráno třetí den po oplodnění, když se normálně vyvíjející se embrya dosáhnout osmi-buněčném stadiu. Biopsie se obvykle provádí na embryích s méně než 50% anukleovaných fragmentů a v 8-buněčném nebo pozdějším stadiu vývoje. Je udělán otvor v zona pellucida a jednoho nebo dvou blastomer obsahující jádra jsou jemně sáním nebo extrudovaný přes otvor.Hlavní výhodou biopsie štěpného stupně oproti analýze PB je to, že lze studovat genetický vstup obou rodičů. Na druhou stranu, štěpení-fáze embrya jsou zjištěno, že mají vysokou míru chromozomální mosaicismus, uvedení do otázku, zda výsledky získané na jedné nebo dvou blastomer byly reprezentativní pro zbytek embrya. Z tohoto důvodu některé programy využívají kombinaci biopsie PB a biopsie blastomery. Kromě toho biopsie ve štěpném stadiu, jako v případě biopsie PB, poskytuje velmi omezené množství tkáně pro diagnostiku, což vyžaduje vývoj jednobuněčných PCR a rybích technik.Ačkoli teoreticky PB biopsie a blastocystová biopsie jsou méně škodlivé než biopsie ve fázi štěpení, toto je stále převládající metoda. Používá se přibližně v 94% cyklů PGD hlášených konsorciu ESHRE PGD. Hlavními důvody jsou to, že umožňuje bezpečnější a úplnější diagnózu než biopsie PB a stále ponechává dostatek času na dokončení diagnózy před tím, než musí být embrya nahrazena v děloze pacienta, na rozdíl od biopsie blastocysty.Ze všech fází štěpení je obecně dohodnuto, že optimální okamžik pro biopsii je v osmičlenném stádiu. Je diagnosticky bezpečnější než biopsie PB a na rozdíl od biopsie blastocysty umožňuje diagnostiku embryí před 5.dnem. V této fázi jsou buňky stále totipotentní a embrya ještě nejsou zhutněna. I když bylo prokázáno, že až čtvrtina lidského embrya mohou být odstraněny bez narušení jeho vývoje, stále zůstává být zkoumán, zda je biopsie z jedné nebo dvou buněk koreluje se schopností embrya se dále rozvíjet, implantát a růst do plné období těhotenství.

Ne všechny způsoby otevírání zona pellucida mají stejnou úspěšnost, protože blahobyt embrya a/nebo blastomera může být ovlivněna postup používá pro biopsii. Zona vrtání s kyselinou Tyrode řešení (ZD) byl podíval na ve srovnání s částečnou zona disekce (PZD) určit, která technika by mohla vést k úspěšnější těhotenství a mají menší vliv na embryo a/nebo blastomera. ZD používá trávicí enzym, jako je pronáza, což z něj činí metodu chemického vrtání. Chemické látky používané v ZD mohou mít škodlivý účinek na embryo. PZD používá skleněnou mikrojehlu k řezání zona pellucida, což z ní činí mechanickou pitvu, která obvykle vyžaduje kvalifikované ruce k provedení postupu. Ve studii, která zahrnovala 71 párů, byla ZD provedena ve 26 cyklech od 19 párů a PZD byla provedena v 59 cyklech od 52 párů. V jedné buněčné analýze byla úspěšnost 87,5% ve skupině PZD a 85,4% ve skupině ZD. Věk matky, počet získaných oocytů, rychlost oplodnění a další proměnné se mezi skupinami ZD a PZD nelišily. Bylo zjištěno, že PZD vedlo k významně vyšší míře těhotenství (40,7% oproti 15,4%), probíhajícímu těhotenství (35,6% oproti 11,5%) a implantaci (18,1% oproti 5,7%) než ZD. To naznačuje, že použití mechanické metody PZD v biopsiích blastomer pro preimplantační genetickou diagnostiku může být zdatnější než použití chemické metody ZD. Úspěch PZD nad ZD lze připsat chemické činidlo v ZD mít škodlivé účinky na embryo a/nebo blastomera. V současné době je zona vrtání pomocí laseru převládající metodou otevírání zona pellucida. Použití laseru je jednodušší technika než použití mechanických nebo chemických prostředků. Laserové vrtání by však mohlo být pro embryo škodlivé a pro laboratoře oplodnění in vitro je velmi nákladné používat, zejména pokud PGD není v moderní době převládajícím procesem. PZD by mohlo být životaschopnou alternativou k těmto otázkám.

Blastocysty biopsyEdit

Ve snaze překonat obtíže související s single-mobilní technik, to bylo navrhl, aby biopsie embrya ve stádiu blastocyst, které poskytují větší množství výchozí materiál pro stanovení diagnózy. Bylo prokázáno, že pokud jsou ve stejné zkumavce přítomny více než dvě buňky, hlavní technické problémy jednobuněčné PCR nebo FISH by prakticky zmizely. Na druhou stranu, stejně jako v případě štěpení-fáze biopsie, chromozomální rozdíly mezi vnitřní buněčné hmoty a trophectoderm (TE) může snížit přesnost diagnózy, i když to mosaicismus byl ohlásen být nižší než v výstřih-fáze embrya.

bylo prokázáno, že biopsie TE je úspěšná u zvířecích modelů, jako jsou králíci, myši a primáti. Tyto studie ukazují, že odstranění některých TE buněk není škodlivé pro další vývoj embrya in vivo.

biopsie lidské blastocysty pro PGD se provádí vytvořením díry v ZP třetí den in vitro kultury. To umožňuje vyvíjejícímu se TE vyčnívat po blastulaci, což usnadňuje biopsii. Na pátý den po oplodnění, přibližně pět buňky jsou vyříznuta z TE pomocí skleněné jehly nebo laserové energie, takže embryo, do značné míry nedotčená a bez ztráty vnitřní buněčné hmoty. Po diagnóze mohou být embrya nahrazena během stejného cyklu nebo kryokonzervována a přenesena v následujícím cyklu.

tento přístup má dvě nevýhody vzhledem k fázi, ve které se provádí. Za prvé, pouze přibližně polovina preimplantačních embryí dosáhne fáze blastocysty. To může omezit počet blastocyst dostupných pro biopsii, což v některých případech omezuje úspěch PGD. Mc Arthur a spolupracovníci uvádějí, že 21% zahájených cyklů PGD nemělo embryo vhodné pro Te biopsii. Toto číslo je přibližně čtyřikrát vyšší než průměrný předložený ESHRE PGD konsorcia dat, kde PB a dekoltu-fáze biopsie jsou převládající uvádí metody. Na druhou stranu, zpoždění biopsie k této pozdní fázi vývoje omezuje čas provést genetické diagnostiky, takže je obtížné opakovat druhé kolo PCR nebo rehybridize RYBY sondy před embrya by měly být převedeny zpět do pacienta.

odběr vzorků kupovitých buněk

odběr vzorků kupovitých buněk lze provést kromě odběru polárních těles nebo buněk z embrya. Protože molekulární interakce mezi kumulární buňky a oocyt, profilování genové exprese z kumulárních může být provedena pro odhad oocytů kvality a účinnosti ovariální hyperstimulace protokolu, a může nepřímo předvídat, aneuploidie, vývoj embrya a výsledky těhotenství.

neinvazivní preimplantační genetické screeningové metody (NIPGS)Edit

tradiční biopsie embrya může být invazivní a nákladná. Proto vědci mají pokračující hledání najít méně invazivní metody pro preimplantační genetické testování. Studie na nové non-invazivní, preimplantační genetika screeningové metody (NIPGS) jako blastocoel tekutiny a strávil embryo média nedávno byla zveřejněna jako alternativa k tradiční metody,

Preimplantační Genetický Screening Testování pomocí Blastocoel Tekutiny (BF)Při běžném IVF procesu, dobré praxe vitrifikovat embryí zvyšuje šanci na zdravé těhotenství. Během procesu vitrifikace je rozvinutý výbuch dehydratován a jeho blastokoelová dutina se zhroutí pro proces zmrazování. Existuje mnoho metod, které byly použity k usnadnění zhroucení včetně laserového pulzu, opakované micropipetting, mikrojehlové punkce nebo microsuction Běžně tato tekutina by pak být zlikvidován, nicméně s preimplantační genetické testování BL, tato tekutina je uložit a poté testovány na DNA. Tato DNA je myšlenka být z buněk, které prošly apoptózy nalézt v vyvíjejícího se embrya

Preimplantační Genetické Testování pomocí Blastocysty Kultury Podmíněné Střední (BCCM)Další metoda pro méně invazivní preimplantační genetické testování zahrnuje testování kultura media embryo vyvinula. Bylo zjištěno, že embryo uvolňuje fragmenty DNA z buněk, které zemřely během inkubační doby. S tímto vědomím, vědci dokázali, že by mohli izolovat DNA a použít je pro preimplantační genetické testování

výhody a Důsledky méně invazivní pre implantace genetická testingWhile je rozporuplný důkaz o tom, zda nebo ne více tradiční metody preimplantační genetické testování jsou škodlivé pro embryo tam je novější metody méně invazivní a stejně účinné metody zkoušení. V tomto smyslu jsme se obrátili na preimplantační genetické testování pomocí blastocoel tekutiny a strávil embryo média. Jedním z problémů těchto alternativ je minimální množství DNA, se kterým je třeba pracovat. Další velmi důležitou otázkou je, zda je tato technologie přesná. Obě tyto obavy nedávno řešil Kuznyetsov. Kuznyetsov se rozhodl použít obě metody kombinující množství DNA získané z obou technik. Poté, co byla DNA izolována, byla použita pro preimplantační genetické testování. Výsledky ukázaly, že pokud obě metody Blastocysty Tekutiny a Embryo Strávil Média byly použity v kombinaci se ukázalo, cordance sazba pro celý chromozom kopírování 87.5% ve srovnání s trophectoderm, 96,4% ve srovnání s celou Blastocystou (zlatý standard). Navíc po amplifikaci pomocí této nové metody byli schopni produkovat 25,0-54,0 ng / ul DNA na vzorek. S tradičními metodami, jako jsou trophectoderm jsou shromažďovány 10-44 ng/ul

Genetické analýzy techniquesEdit

Fluorescenční in situ hybridizace (FISH) a Polymerázové řetězové reakce (PCR) jsou dvě běžně používané, první generace technologií v PGD. PCR se obecně používá k diagnostice monogenních poruch a FISH se používá k detekci chromozomálních abnormalit (například screening aneuploidie nebo chromozomální translokace). Během několika posledních let, různé pokroky v testování PGD umožnily zlepšení komplexnosti a přesnosti dostupných výsledků v závislosti na použité technologii. Nedávno byla vyvinuta metoda umožňující fixaci metafázových destiček z jednotlivých blastomer. Tato technika ve spojení s FISH, m-FISH může produkovat více spolehlivé výsledky, protože analýza se provádí na celý metafáze desky

kromě RYB a PCR, single cell sekvenování genomu je zkoušena jako metoda preimplantační genetické diagnostiky. To charakterizuje úplnou sekvenci DNA genomu embrya.

FISHEdit

FISH je nejčastěji používanou metodou pro stanovení chromozomální konstituce embrya. Na rozdíl od karyotypizace může být použit na interfázových chromozomech, takže může být použit na vzorcích PBs, blastomer a TE. Buňky jsou fixovány na sklíčka skleněného mikroskopu a hybridizovány pomocí DNA sond. Každá z těchto sond je specifická pro část chromozomu a je označena fluorochromem.

Dual RYBY byl považován za účinnou techniku pro stanovení pohlaví z lidských preimplantační embrya a další schopnost detekovat abnormální chromozom kopírovat čísla, které není možné pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR).

v Současné době je velký panel sond jsou dostupné pro různé segmenty všech chromozomů, ale omezený počet různých fluorochromes omezuje počet signálů, které mohou být analyzovány současně.

typ a počet sond použitých na vzorku závisí na indikaci. Pro určení pohlaví (používá se například při PCR protokolu pro dané X-vázaná porucha není k dispozici), sondy pro chromozomy X a Y jsou použity spolu s sondy pro jeden nebo více autozomů jako vnitřní RYBY kontrolu. Může být přidáno více sond pro kontrolu aneuploidií, zejména těch,které by mohly vést k životaschopnému těhotenství (jako je trizomie 21). Použití sond pro chromozomy X, Y, 13, 14, 15, 16, 18, 21 a 22 má potenciál detekovat 70% aneuploidií nalezených při spontánních potratech.

aby bylo možné analyzovat více chromozomů na stejném vzorku, lze provést až tři po sobě jdoucí kola ryb. V případě přeskupení chromozomů je třeba zvolit specifické kombinace sond, které lemují oblast zájmu. Má se za to, že technika ryb má chybovost mezi 5 a 10%.

hlavním problémem použití ryb ke studiu chromozomální konstituce embryí je zvýšená míra mozaiky pozorovaná ve stádiu lidské preimplantace. Meta-analýza více než 800 embryí přišel k výsledku, že přibližně 75% preimplantovaných embryí jsou mozaiky, z nichž přibližně 60% jsou diploidní–aneuploidní mozaiky a přibližně 15% aneuploidní mozaiky. Li a spolupracovníci zjistili, že 40% embryí diagnostikovaných jako aneuploid v den 3 se ukázalo jako euploidní vnitřní buněčná hmota v den 6. Staessen a spolupracovníci zjistili, že 17,5% embryí diagnostikována jako abnormální během PGS a podrobeny post-PGD nové vyhodnocení, bylo zjištěno, že obsahují také normální buňky, a 8,4% byly nalezeny makroskopicky normální. Jako důsledek, to byla zpochybňována, zda jedna nebo dvě buňky studovány z embrya jsou skutečně reprezentativní úplné embryo, a zda je životaschopná embrya nejsou vyřazeny z důvodu omezení technika.

PCREdit

Kary Mullis koncipován PCR v roce 1985 jako in vitro zjednodušené reprodukce in vivo procesu replikace DNA. S využitím chemických vlastností DNA a dostupnosti termostabilních DNA polymeráz umožňuje PCR obohacení vzorku DNA pro určitou sekvenci. PCR poskytuje možnost získat velké množství kopií určitého úseku genomu, což umožňuje další analýzu. Jedná se o vysoce citlivou a specifickou technologii, díky níž je vhodná pro všechny druhy genetické diagnostiky, včetně PGD. V současné době existuje mnoho různých variací na samotné PCR, stejně jako na různých metodách pro zadní analýzu produktů PCR.

při použití PCR v PGD se člověk potýká s problémem, který v rutinní genetické analýze neexistuje: nepatrné množství dostupné genomové DNA. Protože se PGD provádí na jednotlivých buňkách, musí být PCR přizpůsobena a tlačena na své fyzické limity a použít minimální možné množství šablony: což je jeden řetězec. To znamená dlouhý proces jemného doladění podmínek PCR a náchylnost ke všem problémům konvenční PCR, ale několik stupňů se zintenzivnilo. Vysoký počet potřebných PCR cyklů a omezené množství šablony činí jednobuněčnou PCR velmi citlivou na kontaminaci. Dalším problémem specifickým pro jednobuněčnou PCR je fenomén alely drop out (ADO). Skládá se z náhodné ne-amplifikace jedné z alel přítomných v heterozygotním vzorku. ADO vážně ohrožuje spolehlivost PGD, protože heterozygotní embryo by mohlo být diagnostikováno jako postižené nebo neovlivněné v závislosti na tom, která alela by se nezvětšila. To se týká zejména PGD pro autozomálně dominantní poruchy, kde ADO postižené alely může vést k přenosu postiženého embrya.

Několik založené na PCR testy byly vyvinuty pro různé onemocnění, jako triplet repeat geny spojené s myotonickou dystrofií a křehké X v jediné lidské somatické buňky, gamety a embrya.

NGSEdit

od roku 2014 se v PGT provádí sekvenování nové generace (NGS). NGS, také známý jako masivní paralelní sekvenování, je skupina technik schopen sekvenování velkého množství DNA za rozumnou cenu a čas. Může nám poskytnout obecný pohled na kompletní genom embrya, včetně mitochondriálního. Tyto techniky jsou založeny na sekvenování krátké čte kolem 400 základny každého a překrývání těchto čte s výkonným zarovnání software.

Podobně, NGS nám také umožňuje detekci aneuploidií 24 chromozomů a jeden-genové vady, kdy je údaj od dopravce rodiče. Hlavní výhodou je, že NGS může kombinovat detekci jak aneuploidií, tak monogenních onemocnění s jedinou biopsií a snížila dostupné náklady, čímž je zpřístupnila.

dva příklady NGS jsou pyrosekvenování a reverzibilní barvicí Terminátor.

stanovení diagnózyedit

stanovení diagnózy v PGD není vždy jednoduché. Kritéria použitá pro výběr embryí, která mají být nahrazena po výsledcích FISH nebo PCR, nejsou ve všech centrech stejná.V případě RYB, v některých zařízeních se pouze embrya, která se nahrazuje, že se zjistí, že být chromozomálně normální (to je, ukazuje dva signály pro gonosomes a analyzovány autozomy) po analýze jednoho nebo dvou blastomer, a když se dva blastomer jsou analyzovány, výsledky by měly být shodné. Ostatní centra tvrdí, že embrya diagnostikována jako monosomic by mohla být převedena, protože falešné monosomie (tj. ztráta jedné RYBY signálu v normální diploidní buňce) je nejčastěji se vyskytující chybné diagnóze. V těchto případech neexistuje riziko aneuploidního těhotenství a normální diploidní embrya nejsou ztracena pro přenos kvůli chybě ryb. Navíc bylo prokázáno, že embrya diagnostikovaná jako monosomická v den 3 (s výjimkou chromozomů X a 21) se nikdy nevyvíjejí na blastocysty, což koreluje se skutečností, že tyto monosomie nejsou nikdy pozorovány v probíhajících těhotenstvích.

Diagnóza a diagnóza v PGD pomocí PCR byly matematicky modelovány v práci Navidi a Arnheim a Lewis a spolupracovníků. Nejdůležitějším závěrem těchto publikací je, že pro efektivní a přesnou diagnózu embrya jsou vyžadovány dva genotypy. To může být založeno na propojeném genotypu markerů a onemocnění z jedné buňky nebo na genotypech markerů / onemocnění dvou buněk. Zajímavým aspektem zkoumání v těchto dokumentech je podrobně studovat všechny možné kombinace alel, které se mohou objevit v výsledků PCR pro konkrétní embryo. Autoři naznačují, že některé genotypy, které mohou být získány během diagnózy nemusí být shodné s očekávaným vzor propojených marker genotypů, ale stále poskytuje dostatečnou jistotu o nedotčena genotyp embrya. Ačkoli jsou tyto modely uklidňující, jsou založeny na teoretickém modelu a obecně je diagnóza stanovena na konzervativnějším základě, jehož cílem je vyhnout se Možnosti nesprávné diagnózy. Když nečekané alely objeví v průběhu analýzy buňky, v závislosti na genotypu pozorován, to je za to, že buď abnormální buňky byly analyzovány nebo, že ke kontaminaci došlo, a že žádná diagnóza může být stanovena. Případ, kdy lze abnormalitu analyzované buňky jasně identifikovat, je případ, kdy se pomocí multiplexu PCR pro Spojené markery nacházejí ve vzorku pouze alely jednoho z rodičů. V tomto případě může být buňka považována za nesoucí monosomii pro chromozom, na kterém jsou umístěny markery, nebo případně jako haploidní. Vzhled jediné alely, která indikuje postižený genotyp, je považován za dostatečný k diagnostice embrya jako postiženého, a embrya, u nichž byla diagnostikována kompletní neovlivněný genotyp, jsou upřednostňována pro náhradu. Ačkoli tato politika může vést k nižšímu počtu neovlivněných embryí vhodných k přenosu, považuje se za vhodnější než možnost nesprávné diagnózy.

preimplantační genetická haplotypieeditovat

Preimplantační genetické haplotyping (PGH) je PGD techniku, kde haplotyp genetických markerů, které mají statistické sdružení cíl nemoci jsou identifikovány, spíše než mutace způsobující onemocnění.

jakmile je pro určité onemocnění vytvořen panel přidružených genetických markerů, může být použit pro všechny nosiče tohoto onemocnění. Naproti tomu, protože i monogenní onemocnění může být způsobeno mnoha různými mutacemi v postiženém genu, konvenční metody PGD založené na nalezení specifické mutace by vyžadovaly testy specifické pro mutaci. PGH tak rozšiřuje dostupnost PGD na případy, kdy nejsou k dispozici testy specifické pro mutace.

PGH má také výhodu oproti RYBY v RYBY, není obvykle schopen provést diferenciaci mezi embryi, které mají vyvážené formě chromozomální translokace a přívodů homologní normální chromosomy. Tato neschopnost může být vážně škodlivá pro provedenou diagnózu. PGH může rozlišovat, že ryby často nemohou. PGH to dělá pomocí polymorfních markerů, které jsou vhodnější pro rozpoznávání translokací. Tyto polymorfní markery jsou schopny rozlišovat mezi embryi, která nesla normální, vyvážený, a nevyvážené translokace. FISH také vyžaduje větší fixaci buněk pro analýzu, zatímco PGH vyžaduje pouze přenos buněk do zkumavek polymerázové řetězové reakce. Přenos buněk je jednodušší metoda a ponechává méně prostoru pro selhání analýzy.

přenos Embryí a kryokonzervace nadbytečných embryosEdit

přenos Embryí se obvykle provádí na den, tři nebo pět dní po oplodnění, načasování v závislosti na použité metody pro PGD a standardní postupy IVF centrum, kde se provádí.

se zavedením politiky přenosu jednoho embrya v Evropě, jejímž cílem je snížit výskyt vícečetného těhotenství po ART, se obvykle v děloze nahradí jedno embryo nebo časná blastocysta. Sérový hCG se stanoví 12. den. Pokud je zjištěno těhotenství, provede se ultrazvukové vyšetření po 7 týdnech, aby se potvrdila přítomnost srdečního tepu plodu. Páry se obecně doporučují podstoupit PND kvůli, i když nízké, riziko nesprávné diagnózy.

není neobvyklé, že po PGD existuje více embryí vhodných pro přenos zpět k ženě, než je nutné. Pro páry podstupující PGD jsou tato embrya velmi cenná, protože současný cyklus páru nemusí vést k probíhajícímu těhotenství. Kryokonzervace embryí a pozdější rozmrazení a náhrada jim mohou dát druhou šanci na těhotenství, aniž by museli opakovat těžkopádné a drahé postupy ART a PGD.