a PGD a beültetés előtt végzett genetikai diagnózis egyik formája. Ez azt jelenti, hogy a beteg petesejtjeit in vitro meg kell megtermékenyíteni, az embriókat pedig tenyészetben kell tartani a diagnózis megállapításáig. Ezen embriókon biopsziát kell végezni annak érdekében, hogy olyan anyagot kapjunk, amelyen a diagnózist elvégezzük. Maga a diagnózis több technikával is elvégezhető, a vizsgált állapot jellegétől függően. A PCR-alapú módszereket általában monogén rendellenességekre és halakra használják kromoszómális rendellenességek esetén, valamint azoknak az eseteknek a szexelésére, amelyekben nem áll rendelkezésre PCR-protokoll X-hez kapcsolódó betegség esetén. Ezeket a technikákat ki kell igazítani a blasztomereken történő alkalmazáshoz, és a klinikai alkalmazás előtt alaposan meg kell vizsgálni az egysejtű modelleken. Végül, az embriócsere után a jó minőségű, nem károsított embriókat krioprezerválni lehet, felolvasztani és a következő ciklusban visszaadni.

embryosEdit

jelenleg az összes PGD embriót asszisztált reprodukciós technológiával állítják elő, bár a természetes ciklusok és az in vivo megtermékenyítés, amelyet a méhmosás követett, a múltban megpróbálták, és most nagyrészt elhagyták. A petesejtek nagy csoportjának elérése érdekében a betegek kontrollált petefészek-stimuláción (COH) mennek keresztül. A COH-t agonista protokoll szerint, gonadotropin-releasing hormon (GnRH) analógok alkalmazásával, az agyalapi mirigy deszenzitizációjára, humán menopauzális gonadotropinokkal (hMG) vagy rekombináns follikulus stimuláló hormonnal (FSH) kombinálva, vagy egy rekombináns FSH-val kombinált antagonista protokoll alkalmazásával, a beteg profiljának (életkor, testtömeg-index (BMI), endokrin paraméterek) klinikai értékelése szerint. a hCG-t akkor adják be, ha a transzvaginális ultrahangvizsgálat során legalább három, 17 mm-nél nagyobb átlagos átmérőjű tüsző látható. A transzvaginális ultrahang-vezérelt petesejt-visszanyerés a hCG beadása után 36 órával történik. A luteális fázis kiegészítése 600 µg természetes mikronizált progeszteron napi intravaginális adagolásából áll.

az oocitákat gondosan denudálják a cumulus sejtekből, mivel ezek a sejtek a PGD során szennyeződésforrás lehetnek, ha PCR-alapú technológiát alkalmaznak. A jelentett ciklusok többségében intracitoplazmatikus spermium injekciót (ICSI) használnak az IVF helyett. Ennek fő oka a zona pellucida-hoz tapadt maradék spermával való szennyeződés megelőzése, valamint a nem várt megtermékenyítési kudarc elkerülése. Az ICSI-eljárást Érett metafázis-II petesejteken végezzük, majd a megtermékenyítést 16-18 órával később értékeljük. Az embriófejlődést a biopszia előtt minden nap tovább kell értékelni, amíg a nő méhébe nem kerül. A hasítási szakaszban az embrióértékelést naponta végzik a blasztomerek száma, mérete, sejtformája és fragmentációs sebessége alapján. A 4. napon az embriókat tömörítési fokuk függvényében pontozták, a blasztocisztákat pedig a throfektoderm és a belső sejttömeg minősége, valamint a tágulási fokuk alapján értékelték.

biopszia eljárásokszerkesztés

mivel a PGD különböző fejlődési stádiumú sejteken végezhető, a biopsziás eljárások ennek megfelelően változnak. Elméletileg a biopszia minden preimplantációs szakaszban elvégezhető, de csak három javasolt: megtermékenyítetlen és megtermékenyített petesejteken( poláris testek, PBs), a harmadik napon hasítási fázisú embriókon (blasztomerek esetében) és blasztocisztákon (trofektoderm sejtek esetében).

a biopsziás eljárás mindig két lépést foglal magában: a zona pellucida megnyitását és a sejt(ek) eltávolítását. Vannak különböző módszerek, mind a lépéseket, beleértve a mechanikai, kémiai, fizikai (Tyrode van savas oldat), valamint lézeres technológia a megsértése, a zona pellucida, extrudálás vagy törekvés az eltávolítás, a PBs pedig blastomeres, valamint a beékelődés a trophectoderm sejtek.

Polar body biopsyEdit

a polar body biopszia egy polar test mintavétele, amely egy kis haploid sejt, amely egyidejűleg tojássejtként alakul ki az oogenezis során, de általában nem képes megtermékenyíteni. A blasztociszta biopsziához képest a poláris test biopsziája potenciálisan alacsonyabb költségekkel, kevésbé káros mellékhatásokkal járhat, és érzékenyebb lehet a rendellenességek kimutatására. A poláris testek PGD-ben való alkalmazásának fő előnye, hogy nem szükségesek a sikeres megtermékenyítéshez vagy a normális embrionális fejlődéshez, így biztosítva az embrió káros hatását. Az egyik hátránya a PB biopszia, hogy csak tájékoztatást nyújt az anyai hozzájárulás, hogy az embrió, ezért esetekben az anyától örökölt autoszomális domináns, X-kromoszómához kötött, amelyek kizárólag az anyára továbbított lehet diagnosztizálni, de autoszomális recesszív zavarok csak részben lehet diagnosztizálni. További hátránya a diagnosztikai hiba fokozott kockázata, például a genetikai anyag lebomlása vagy a rekombináció olyan eseményei miatt, amelyek heterozigóta első poláris testekhez vezetnek.

hasítási-stage biopszia (blastomere biopszia)Edit

a hasítási-stage biopsziát általában a megtermékenyítés utáni harmadik nap reggelén végzik, amikor a normálisan fejlődő embriók elérik a nyolcsejtes stádiumot. A biopsziát általában az anukleált fragmensek kevesebb mint 50%-ával rendelkező embriókon, 8 sejtes vagy későbbi fejlődési szakaszban végzik. A zona pellucida-ban lyuk keletkezik, és egy vagy két, magot tartalmazó blastomert finoman szívnak vagy extrudálnak a nyíláson keresztül.A hasítási fázisú biopszia fő előnye a PB analízissel szemben az, hogy mindkét szülő genetikai bemenetét meg lehet vizsgálni. Másrészről, a hasítási szakaszban lévő embriók magas kromoszómális mozaicizmussal rendelkeznek, megkérdőjelezve, hogy az egy vagy két blastomeren kapott eredmények reprezentatívak lesznek-e az embrió többi részében. Ez az oka annak, hogy egyes programok hasznosítani kombinációja PB biopszia és blastomere biopszia. Továbbá, a hasítási fázisú biopszia, mint a PB biopszia esetében, nagyon korlátozott mennyiségű szövetet eredményez a diagnózishoz, ami szükségessé teszi az egysejtű PCR és HALTECHNIKÁK kifejlesztését.Bár elméletileg a PB biopszia és a blasztociszta biopszia kevésbé káros, mint a hasítási fázisú biopszia, ez még mindig az elterjedt módszer. Az ESHRE PGD Konzorciumnak jelentett PGD ciklusok körülbelül 94% – ában használják. Ennek fő oka, hogy biztonságosabb és teljesebb diagnózist tesz lehetővé, mint a PB biopszia, és még mindig elég időt hagy a diagnózis befejezésére, mielőtt az embriókat a beteg méhében ki kell cserélni, ellentétben a blastocist biopsziával.Az összes hasítási szakasz közül általában egyetértünk abban, hogy a biopszia optimális pillanata a nyolcsejtes szakaszban van. Diagnosztikailag biztonságosabb, mint a PB biopszia, ellentétben a blastocist biopsziával, lehetővé teszi az embriók diagnosztizálását az 5. nap előtt. Ebben a szakaszban a sejtek még mindig totipotensekés az embriók még nem tömörülnek. Bár bebizonyosodott, hogy akár egy negyed emberi embrió nem távolítható el anélkül, hogy megzavarja a fejlesztés, csak még nem vizsgálták, hogy a biopszia, hogy egy vagy két sejt összefügg azzal a képességgel, az embrió további fejlesztése, implantátumot a nő egy teljes ciklus terhesség.

A zona pellucida megnyitásának nem minden módszere azonos sikerességi rátával rendelkezik, mivel az embrió és/vagy a blastomere jólétét befolyásolhatja a biopsziához alkalmazott eljárás. Zona fúrás savval Tyrode-oldat (ZD) volt nézett képest részleges zona dissectio (PZD), hogy melyik technika lenne vezet több sikeres terhesség kevesebb hatással a magzat és/vagy blasztomer. A ZD olyan emésztő enzimet használ, mint a pronase, ami kémiai fúrási módszerré teszi. A zd-ben használt vegyi anyagok káros hatással lehetnek az embrióra. A PZD üveg mikronemezt használ a zona pellucida vágásához, ami mechanikus boncolási módszerré teszi, amely tipikusan képzett kezekre van szüksége az eljárás végrehajtásához. Egy vizsgálatban, amelyben 71 pár vett részt, a ZD-t 19 pár 26 ciklusában, a PZD-t pedig 59 ciklusban végezték 52 párból. Az egysejtű analízisben a pzd csoportban 87,5% – os, a ZD csoportban pedig 85,4% – os sikerességi arány volt. Az anyai életkor, a begyűjtött petesejtek száma, a megtermékenyítési arány és más változók nem különböztek a ZD és a PZD csoportok között. Megállapítást nyert, hogy a PZD a terhesség szignifikánsan magasabb arányához vezetett (40,7% vs 15,4%), a folyamatban lévő terhességhez (35,6% vs 11,5%), valamint az implantációhoz (18,1% vs 5,7%), mint a ZD. Ez arra utal, hogy a pzd mechanikai módszerének alkalmazása a blastomere biopsziákban a preimplantációs genetikai diagnózishoz sokkal jártasabb lehet, mint a zd kémiai módszerének alkalmazása. A pzd zd feletti sikere annak tulajdonítható, hogy a zd-ben lévő vegyi anyag káros hatással van az embrióra és/vagy a blastomere-re. Jelenleg a Zona lézeres fúrása a zona pellucida megnyitásának domináns módszere. A lézer használata könnyebb technika, mint mechanikus vagy kémiai eszközök használata. A lézeres fúrás azonban káros lehet az embrióra, és nagyon drága az in vitro megtermékenyítő laboratóriumok számára, különösen akkor, ha a PGD nem elterjedt folyamat, mint a modern időkben. A PZD életképes alternatíva lehet ezekre a kérdésekre.

Blastocist biopsyEdit

az egysejtes technikákkal kapcsolatos nehézségek leküzdése érdekében javasolták az embriók biopsziáját a blastocist szakaszban, nagyobb mennyiségű kiindulási anyagot biztosítva a diagnózishoz. Kimutatták, hogy ha ugyanabban a mintacsőben több mint két sejt van jelen, az egysejtű PCR vagy hal fő technikai problémái gyakorlatilag eltűnnek. Másrészt, mint a hasítási stádiumú biopszia esetében, a belső sejttömeg és a trofektoderm (te) közötti kromoszómális különbségek csökkenthetik a diagnózis pontosságát, bár ez a mozaikosság alacsonyabb, mint a hasítási szakaszban lévő embriók esetében.

A TE biopszia olyan állatmodellekben bizonyult sikeresnek, mint a nyulak, egerek és főemlősök. Ezek a vizsgálatok azt mutatják, hogy egyes TE-sejtek eltávolítása nem káros az embrió további in vivo fejlődésére.

a PGD humán blasztocisztás stádiumú biopsziáját úgy végezzük, hogy lyukat készítünk a ZP-ben az in vitro kultúra harmadik napján. Ez lehetővé teszi, hogy a fejlődő TE a blastuláció után kinyúljon, megkönnyítve a biopsziát. A megtermékenyítés utáni ötödik napon körülbelül öt sejtet kivágnak a TE-ből üvegtűvel vagy lézerenergiával, így az embrió nagyrészt érintetlen marad, anélkül, hogy elveszítené a belső sejt tömegét. A diagnózis után az embriók ugyanabban a ciklusban helyettesíthetők, vagy krioprezerváltak, majd egy későbbi ciklusban átvihetők.

ennek a megközelítésnek két hátránya van, annak a szakasznak köszönhetően, amelyben végrehajtják. Először is, a preimplantációs embrióknak csak körülbelül a fele éri el a blastocisztás stádiumot. Ez korlátozhatja a biopsziához rendelkezésre álló blasztociszták számát, egyes esetekben korlátozva a PGD sikerét. Mc Arthur és munkatársai arról számoltak be, hogy a megkezdett PGD ciklusok 21% – ában nem volt olyan embrió, amely alkalmas lenne TE biopsziára. Ez a szám körülbelül négyszer nagyobb, mint az ESHRE PGD konzorcium adatai által közölt átlag, ahol a PB és a hasítási fázisú biopszia az elsődleges jelentett módszerek. Másrészről, a biopszia késleltetése a fejlődés ezen késői szakaszába korlátozza a genetikai diagnózis elvégzésének idejét, megnehezítve a PCR második fordulójának újrarajzolását vagy a HALSZONDÁK újrabridizálását, mielőtt az embriókat vissza kell vinni a betegbe.

Cumulus cell samplingEdit

a cumulus sejtek mintavétele az embrió poláris testeinek vagy sejtjeinek mintavételén kívül is elvégezhető. A cumulus sejtek és az oocita közötti molekuláris kölcsönhatások miatt a cumulus sejtek génexpressziós profilozása elvégezhető az oocita minőségének és a petefészek hiperstimulációs protokoll hatékonyságának becslésére, és közvetett módon megjósolhatja az aneuploidia, az embriófejlődés és a terhesség kimenetelét.

nem invazív preimplantációs genetikai szűrési módszerek (NIPGS)Edit

a hagyományos embrióbiopszia invazív és költséges lehet. Ezért a kutatóknak folyamatosan törekedniük kell arra, hogy kevésbé invazív módszereket találjanak a preimplantációs genetikai teszteléshez. Az új, nem invazív preimplantációs genetikai szűrési módszerekre (NIPGS), például a blastocoel folyadékra és az elhasznált embrióhordozókra vonatkozó tanulmányokat a közelmúltban tették közzé a hagyományos módszerek alternatívájaként

preimplantációs genetikai szűrővizsgálat Blastocoel folyadék (BF)alkalmazásával egy normál IVF folyamat során, az embriók vitrifizálására vonatkozó jó gyakorlat növeli az egészséges terhesség esélyét. A vitrifikációs folyamat során egy fejlett robbanás kiszárad, és a blastocoel ürege összeomlik a fagyasztási folyamat során. Számos módszert alkalmaztak az összeomlás megkönnyítésére, beleértve a lézerimpulzust, az ismételt mikropipettálást, a mikroneedle punkciót vagy a mikrosépítést, ezt a folyadékot általában eldobják, azonban a BL preimplantációs genetikai tesztelésével ezt a folyadékot megmentik, majd DNS-re tesztelik. Úgy gondolják, hogy ez a DNS olyan sejtekből származik, amelyek a fejlődő embrióban található apoptózison mentek keresztül

preimplantációs genetikai tesztelés Blastocist tenyészet kondicionált közeg (BCCM) segítségével egy másik módszer a kevésbé invazív preimplantációs genetikai teszteléshez magában foglalja az embrió által kifejlesztett tenyészközeg tesztelését. Megjegyezték, hogy az embrió DNS-fragmentumokat szabadít fel az inkubációs időszak alatt elpusztult sejtekből. Ezt a tudást, a tudósok indokolt, hogy tudták különíteni ezt a DNS-t használni, a preimplantációs genetikai vizsgálat

Az előnyöket, Következményei kevésbé invazív beültetés előtti genetikai testingWhile van egymásnak ellentmondó bizonyíték-e, vagy sem a hagyományos módszerek, a preimplantációs genetikai vizsgálat káros, hogy az embrió van újabb módszerek kevésbé invazív, de ugyanolyan hatékony vizsgálati módszerek. Ennek érdekében a preimplantációs genetikai vizsgálathoz fordultunk, blastocoel folyadékot használva, és az embrionális médiát használva. Ezeknek az alternatíváknak az egyik problémája a minimális mennyiségű DNS, amellyel dolgozni kell. Egy másik nagyon fontos kérdés az, hogy ez a technológia pontos-e vagy sem. Mindkét aggályt Kuznyecov nemrégiben kezelte. Kuznyecov úgy döntött, hogy mindkét módszert alkalmazza, amely egyesíti a mindkét technikából kinyert DNS mennyiségét. Aztán miután a DNS-t izolálták, preimplantációs genetikai tesztelésre használták. Az eredmények azt mutatták, hogy amikor mindkét módszert Blastocisztás folyadék és embrió kiégett Média használták kombinációban mutattak cordance aránya az egész kromoszóma példányt 87.5% a trophectoderm-hez képest, 96,4% az egész Blastocistához képest (arany standard). Ezen túlmenően az új módszerrel végzett amplifikáció után mintánként 25,0-54,0 ng / ul DNS-t tudtak előállítani. A hagyományos módszerek, mint a trophectoderm gyűjtöttek 10-44 ng/ul

genetikai analízis technikákszerkesztés

fluoreszcens in situ hibridizáció (hal) és polimeráz láncreakció (PCR) a két általánosan használt, első generációs technológiák PGD. A PCR-t általában monogén rendellenességek diagnosztizálására használják, a halakat pedig kromoszómális rendellenességek kimutatására használják (például aneuploidy szűrés vagy kromoszóma transzlokációk). Az elmúlt néhány évben a PGD tesztelés különböző fejlesztései lehetővé tették a rendelkezésre álló eredmények érthetőségének és pontosságának javítását az alkalmazott technológiától függően. A közelmúltban kifejlesztettek egy módszert, amely lehetővé teszi a metafázis lemezek egyetlen blastomerből történő rögzítését. Ez a technika együtt HAL, m-HAL képes több megbízható eredményt, mivel az elemzést végzett egész metafázis lemezek

amellett, hogy HALAT, PCR, egyetlen sejt genom szekvenálás tesztelése, mint egy módszer a preimplantációs genetikai diagnózis. Ez jellemzi az embrió genomjának teljes DNS-szekvenciáját.

FISHEdit

a hal a leggyakrabban alkalmazott módszer az embrió kromoszómális felépítésének meghatározására. A kariotipizálással ellentétben interphase kromoszómákon is alkalmazható, így PBs, blastomeres és TE mintákon is alkalmazható. A sejteket üvegmikroszkóppal rögzítik, és DNS-szondákkal hibridizálják. Mindegyik szonda egy kromoszóma egy részére specifikus, és fluorokrómmal van jelölve.

A kettős halat hatékony módszernek tekintették az emberi preimplantációs embriók nemének meghatározására, valamint az abnormális kromoszóma-másolatok számának további kimutatására, ami a polimeráz láncreakcióval (PCR) nem lehetséges.

jelenleg egy nagy próbapanel áll rendelkezésre az összes kromoszóma különböző szegmenseihez, de a különböző fluorokrómák korlátozott száma korlátozza az egyidejűleg elemezhető jelek számát.

a mintán használt szondák típusa és száma a jelzéstől függ. A nemi meghatározáshoz (például amikor egy adott X-kapcsolt rendellenesség PCR protokollja nem áll rendelkezésre), az X és Y kromoszómák szondáit az autoszómák egy vagy több szondájával együtt belső HALVEZÉRLÉSKÉNT alkalmazzák. Több szondát lehet hozzáadni az aneuploidiák ellenőrzéséhez, különösen azokat, amelyek életképes terhességet eredményezhetnek (például egy 21-es triszómia). A szondák használata az X, Y kromoszómákhoz, 13, 14, 15, 16, 18, 21 a 22-es pedig képes kimutatni a spontán abortuszokban talált aneuploidiák 70% – át.

annak érdekében, hogy ugyanazon a mintán több kromoszómát lehessen elemezni, legfeljebb három egymást követő halforduló végezhető el. Kromoszóma-átrendeződések esetén a szondák speciális kombinációit kell kiválasztani, amelyek az érdeklődési területet szegélyezik. A haltechnikát 5-10% közötti hibaarányúnak tekintik.

az embriók kromoszómális alkotmányának tanulmányozására szolgáló halak használatának fő problémája az emberi preimplantációs szakaszban megfigyelt emelkedett mozaicizmus. Több mint 800 embrió meta-analízise arra az eredményre jutott, hogy a preimplantációs embriók körülbelül 75%–a mozaik, amelynek körülbelül 60% – a diploid-aneuploid mozaik, körülbelül 15% – a aneuploid mozaik. Li és munkatársai megállapították, hogy a 3.napon aneuploidként diagnosztizált embriók 40% – ánál kiderült, hogy a 6. napon euploid belső sejt tömege van. Staessen és munkatársai megállapították, hogy a PGS során abnormálisnak diagnosztizált és a PGD utáni újraelemzésnek alávetett embriók 17,5%-A tartalmaz normál sejteket is, és 8,4% – UK súlyosan normálisnak bizonyult. Következésképpen megkérdőjelezték, hogy az embrióból vizsgált egy vagy két sejt valóban reprezentatív-e a teljes embrióra, és hogy az életképes embriókat a technika korlátai miatt nem dobják-e ki.

PCREdit

Kary Mullis 1985-ben a PCR-t a DNS-replikáció in vivo folyamatának in vitro egyszerűsített reprodukciójaként hozta létre. Kihasználva a DNS kémiai tulajdonságait és a termosztálható DNS-polimerázok elérhetőségét, a PCR lehetővé teszi egy DNS-minta dúsítását egy bizonyos szekvenciához. A PCR lehetővé teszi a genom egy adott szakaszának nagy mennyiségű másolatának beszerzését, ami további elemzést tesz lehetővé. Ez egy nagyon érzékeny és specifikus technológia, amely alkalmas mindenféle genetikai diagnózisra, beleértve a PGD-t is. Jelenleg számos különböző változat létezik a PCR-n, valamint a PCR-termékek hátsó elemzésének különböző módszerein.

amikor PCR-t használ a PGD-ben, egy olyan problémával szembesülünk, amely a rutin genetikai elemzésben nem létezik: a rendelkezésre álló genomikus DNS minimális mennyisége. Mivel a PGD-t egyetlen cellán hajtják végre, a PCR-t hozzá kell igazítani és fizikai korlátaihoz kell nyomni, és a lehető legkisebb sablont kell használni: ami egy szál. Ez azt jelenti, hosszú folyamat finomhangolása a PCR Feltételek, valamint a fogékonyság minden problémát a hagyományos PCR, de több fokkal felerősödött. A szükséges PCR ciklusok nagy száma és a sablon korlátozott mennyisége miatt az egysejtű PCR nagyon érzékeny a szennyeződésre. Az egysejtű PCR-re jellemző másik probléma az allél lemorzsolódás (ADO) jelenség. A heterozigóta mintában jelen lévő egyik allél véletlenszerű nem erősítéséből áll. Az ADO komolyan veszélyezteti a PGD megbízhatóságát, mivel heterozigóta embrió diagnosztizálható érintettnek vagy érintetlennek, attól függően, hogy melyik allél nem erősödik. Ez különösen igaz az autoszomális domináns rendellenességek PGD-jére, ahol az érintett allél ADO-ja az érintett embrió átviteléhez vezethet.

számos PCR-alapú vizsgálatot fejlesztettek ki különböző betegségekre, mint például a myotonic dystrophiával és a fragile X-szel összefüggő triplett repeat gének egyetlen emberi szomatikus sejtekben, ivarsejtekben és embriókban.

NGSEdit

2014-től a következő generációs szekvenálás (NGS) a PGT-ben történik. Az NGS, más néven masszív párhuzamos szekvenálás, olyan technikák csoportja, amelyek képesek nagy mennyiségű DNS szekvenálására ésszerű költségek és idő mellett. Ez adhat nekünk egy általános perspektívát a teljes embrió Genom, beleértve a mitokondriális egy. Ezek a technikák alapján szekvenálás rövid olvasás körül 400 bázisok minden átfedő ezeket olvas erős igazítás szoftver.

Hasonlóképpen, az NGS lehetővé teszi az aneuploidiák kimutatását a 24 kromoszómában és az egygén-hibákban, ha a hordozó szülők jelzik. A fő előny az, hogy az NGS egyetlen biopsziával kombinálhatja mind az aneuploidiák, mind a monogén betegségek kimutatását, és csökkenti a megfizethető költségeket, így hozzáférhetőbbé válik.

az NGS két példája a piroszekvenálás és a reverzibilis festék Terminátor.

diagnózis Felállításaszerkesztés

a diagnózis felállítása a PGD-ben nem mindig egyértelmű. A halak vagy PCR-eredmények után helyettesítendő embriók kiválasztásánál alkalmazott kritériumok nem minden központban azonosak.Abban az esetben, ha a HALAK, egyes központok csak embriók helyébe talált eltérést a normál (ez, mutatja, hogy két jel a gonosomes a vizsgált autosomes) az elemzés után egy vagy két blastomeres, amikor két blastomeres elemzése, az eredmények concordant. Más központok azzal érvelnek, hogy a monoszómaként diagnosztizált embriókat át lehet vinni, mivel a hamis monoszómia (azaz egy haljel elvesztése egy normál diploid sejtben) a leggyakrabban előforduló téves diagnózis. Ezekben az esetekben nem áll fenn az aneuploid terhesség kockázata, a normál diploid embriók pedig HALHIBA miatt nem veszítik el az átadást. Ezenkívül kimutatták, hogy a 3.napon monoszómaként diagnosztizált embriók (az X és 21 kromoszómák kivételével) soha nem alakulnak ki blasztocisztává, ami korrelál azzal a ténnyel, hogy ezeket a monoszómákat soha nem figyelték meg a folyamatban lévő terhességekben.

a PCR-t használó PGD diagnózisát és téves diagnózisát matematikailag modellezték Navidi és Arnheim, valamint Lewis és munkatársai munkájában. A publikációk legfontosabb következtetése, hogy az embrió hatékony és pontos diagnosztizálásához két genotípusra van szükség. Ennek alapja lehet egy összefüggő marker és betegség genotípusok egyetlen sejtből vagy marker / betegség genotípusok két sejt. Az ezekben a tanulmányokban feltárt érdekes szempont az allélok minden lehetséges kombinációjának részletes vizsgálata, amelyek egy adott embrió PCR eredményeiben megjelenhetnek. A szerzők azt mutatják, hogy a diagnózis során megszerezhető genotípusok némelyike nem egyeztethető össze a kapcsolódó marker genotípusok várható mintájával, de továbbra is elegendő bizalmat biztosítanak az embrió nem érintett genotípusával kapcsolatban. Bár ezek a modellek megnyugtatóak, elméleti modellen alapulnak, általában a diagnózist konzervatívabb alapon állapítják meg, hogy elkerüljék a téves diagnózis lehetőségét. Ha egy sejt elemzése során váratlan allélok jelennek meg a megfigyelt genotípustól függően, úgy ítélik meg, hogy vagy kóros sejtet elemeztek, vagy szennyeződés történt, és nem állapítható meg diagnózis. Egy olyan eset, amelyben az elemzett sejt rendellenessége egyértelműen azonosítható, amikor a multiplex PCR-t összekapcsolt markerekhez használva csak az egyik szülő alléljai találhatók a mintában. Ebben az esetben a sejt monoszómának tekinthető azon kromoszóma számára, amelyen a markerek találhatók, vagy esetleg haploidként. Az érintett genotípust jelző egyetlen allél megjelenése elegendőnek tekinthető az embrió érintettként történő diagnosztizálásához, és a teljes, nem érintett genotípussal diagnosztizált embriók előnyben részesülnek a helyettesítéshez. Bár ez a politika alacsonyabb számú, nem érintett embriót eredményezhet, amelyek alkalmasak az átvitelre, előnyösebbnek tekintik a téves diagnózis lehetőségét.

preimplantációs genetikai haplotipizálásszerkesztés

preimplantációs genetikai haplotipizálás (PGH) olyan PGD technika, amelyben a genetikai markerek haplotípusát, amelyek statisztikai összefüggésekkel rendelkeznek egy célbetegséggel, a betegséget okozó mutáció helyett azonosítják.

miután egy adott betegséghez kapcsolódó genetikai markerek panelt állapítottak meg, a betegség minden hordozójára alkalmazható. Ezzel szemben, mivel még egy monogén betegséget is számos különböző mutáció okozhat az érintett génben, a specifikus mutáció megtalálásán alapuló hagyományos PGD módszerek mutáció-specifikus vizsgálatokat igényelnek. Így a PGH kiterjeszti a PGD elérhetőségét olyan esetekre, amikor a mutáció-specifikus tesztek nem állnak rendelkezésre.

a PGH előnye a halakkal szemben is, mivel a halak általában nem képesek különbséget tenni a kromoszóma transzlokáció kiegyensúlyozott formájával rendelkező embriók és a homológ normál kromoszómákat hordozó embriók között. Ez a képtelenség súlyosan káros lehet a diagnózisra. A PGH megkülönböztetheti azt a különbséget, amelyet a halak gyakran nem tudnak. A PGH ezt olyan polimorf markerek alkalmazásával teszi, amelyek jobban megfelelnek a transzlokációk felismerésének. Ezek a polimorf markerek képesek megkülönböztetni a normális, kiegyensúlyozott és kiegyensúlyozatlan transzlokációkat hordozó embriókat. A halak több sejtrögzítést igényelnek az elemzéshez, míg a PGH csak a sejtek polimeráz láncreakciós csövekbe történő átvitelét igényli. A sejttranszfer egyszerűbb módszer, és kevesebb teret hagy az analízis meghibásodására.

a felesleges embriók embriótranszferje és krioprezervációja

az Embriótranszfer általában a megtermékenyítés utáni harmadik vagy ötödik napon történik, az időzítés a PGD-hez alkalmazott technikáktól és az IVF-központ standard eljárásaitól függően, ahol azt végzik.

az egy embrióátviteli politika Európában történő bevezetésével, amelynek célja a többes terhesség előfordulásának csökkentése az ART után, általában egy embriót vagy korai blasztocisztát cserélnek a méhben. A szérum hCG-t a 12. napon határozzák meg. Ha terhességet állapítanak meg, 7 hetes ultrahangvizsgálatot végeznek a magzati szívverés jelenlétének megerősítésére. A pároknak általában azt tanácsolják, hogy PND-n menjenek keresztül, bár alacsony, a téves diagnózis kockázata miatt.

nem szokatlan, hogy a PGD után több embrió van, amely alkalmas a nőre való visszatérésre, mint amennyire szükséges. A PGD-ben részesülő párok számára ezek az embriók nagyon értékesek, mivel a pár jelenlegi ciklusa nem vezethet folyamatos terhességhez. Az embrió krioprezervációja, majd későbbi felolvasztása és pótlása második esélyt adhat a terhességre anélkül, hogy újra kellene végezniük a nehézkes és drága művészeti és PGD eljárásokat.