PGD er en form for genetisk diagnose utført før implantasjon. Dette innebærer at pasientens oocytter skal befruktes in vitro og embryoene holdes i kultur til diagnosen er etablert. Det er også nødvendig å utføre en biopsi på disse embryoer for å oppnå materiale som skal utføre diagnosen. Diagnosen i seg selv kan utføres ved hjelp av flere teknikker, avhengig av arten av den studerte tilstanden. GENERELT BRUKES PCR-baserte metoder for monogene lidelser og FISK for kromosomale abnormiteter og for sexing de tilfellene der INGEN PCR-protokoll er tilgjengelig for En X-bundet sykdom. Disse teknikkene må tilpasses for å bli utført på blastomerer og må testes grundig på enkeltcellemodeller før klinisk bruk. Til slutt, etter embryo erstatning, overskudd god kvalitet upåvirket embryoer kan kryopreserveres, tines og overføres tilbake i en neste syklus.

embryoerediger

for Tiden er alle pgd-embryoer oppnådd ved assistert reproduktiv teknologi, selv om bruk av naturlige sykluser og in vivo befruktning etterfulgt av livmorskylling ble forsøkt tidligere og er nå i stor grad forlatt. For å oppnå en stor gruppe oocytter gjennomgår pasientene kontrollert ovariestimulering (COH). COH utføres enten i en agonistprotokoll, ved bruk av gonadotropinfrigjørende hormonanaloger (GnRH) for hypofyse desensibilisering, kombinert med humane menopausale gonadotropiner (hMG) eller rekombinant follikkelstimulerende hormon (FSH), eller en antagonistprotokoll ved bruk av rekombinant FSH kombinert med En GnRH-antagonist i henhold til klinisk vurdering av pasientens profil (alder, kroppsmasseindeks (BMI), endokrine parametere). hCG administreres når minst tre follikler med mer enn 17 mm gjennomsnittlig diameter ses ved transvaginal ultralydsskanning. Transvaginal ultralydstyrt oocyttinnhenting er planlagt 36 timer etter hCG administrasjon. Lutealfasetilskudd består av daglig intravaginal administrering av 600 µ naturlig mikronisert progesteron.

Oocytter blir nøye denudert fra cumuluscellene, da disse cellene kan være en kilde til forurensning under PGD hvis PCR – basert teknologi brukes. I de fleste av de rapporterte syklusene brukes intracytoplasmatisk spermieinjeksjon (ICSI) i stedet FOR IVF. Hovedårsakene er å forhindre forurensning med gjenværende sæd festet til zona pellucida og for å unngå uventet befruktningsfeil. ICSI-prosedyren utføres på modne metafase-II-oocytter og befruktning vurderes 16-18 timer etter. Embryoutviklingen evalueres videre hver dag før biopsi og til overføring til kvinnens livmor. Under spaltningstrinnet utføres embryoevaluering daglig på grunnlag av antall, størrelse, celleform og fragmenteringshastighet av blastomerer. På dag 4 ble embryoer skåret i funksjon av deres komprimeringsgrad, og blastocystene ble evaluert i henhold til kvaliteten på throphectoderm og indre cellemasse og deres ekspansjonsgrad.

Biopsiprosedyrerrediger

DA PGD kan utføres på celler fra forskjellige utviklingsstadier, varierer biopsiprosedyrene tilsvarende. Teoretisk kan biopsien utføres på alle preimplantasjonsstadier, men bare tre har blitt foreslått: på ubefruktede og befruktede oocytter (for polare legemer, PBs), på dag tre spaltningstrinns embryoer (for blastomerer) og på blastocyster (for trofektodermceller).biopsi prosedyren innebærer alltid to trinn: åpningen av zona pellucida og fjerning av cellen(e). Det er forskjellige tilnærminger til begge trinnene, inkludert mekanisk, kjemisk og fysisk (Tyrodes sure løsning) og laserteknologi for brudd på zona pellucida, ekstrudering eller aspirasjon for fjerning Av PBs og blastomerer, og herniation av trofektodermcellene.

Polar body biopsyEdit

En polar body biopsi er prøvetaking av en polar kropp, som er en liten haploid celle som dannes samtidig som en eggcelle under oogenese, men som vanligvis ikke har evne til å bli befruktet. Sammenlignet med en blastocystbiopsi, kan en polar kroppsbiopsi potensielt ha lavere kostnader, mindre skadelige bivirkninger og mer følsom for å oppdage abnormiteter. Hovedfordelen ved bruk av polare legemer i PGD er at de ikke er nødvendige for vellykket befruktning eller normal embryonisk utvikling, og dermed sikrer ingen skadelig effekt for embryoet. En av ulempene ved pb-biopsi er at den bare gir informasjon om mors bidrag til embryoet, og derfor kan tilfeller av maternalt arvet autosomal dominant og X-bundet lidelser som utelukkende er maternalt overført, diagnostiseres, og autosomale recessive lidelser kan bare delvis diagnostiseres. En annen ulempe er den økte risikoen for diagnostiske feil, for eksempel på grunn av nedbrytning av det genetiske materialet eller hendelser av rekombinasjon som fører til heterozygote første polare legemer.

Spaltningsstadie biopsi (blastomere biopsi)Edit

Spaltningsstadie biopsi utføres vanligvis morgenen på dagen tre etter befruktning, når normalt utviklende embryoer når åtte-celletrinnet. Biopsien utføres vanligvis på embryoer med mindre enn 50% av anukleerte fragmenter og på et 8-celle eller senere utviklingsstadium. Et hull er laget i zona pellucida og en eller to blastomerer som inneholder en kjerne, aspireres forsiktig eller ekstruderes gjennom åpningen.Den største fordelen med spaltningsstadiumbiopsi over pb-analyse er at den genetiske inngangen til begge foreldrene kan studeres. På den annen side er spaltning-trinns embryoer funnet å ha en høy grad av kromosomal mosaikk, og stiller spørsmål om resultatene oppnådd på en eller to blastomerer vil være representative for resten av embryoet. Det er av denne grunn at noen programmer benytter en kombinasjon AV pb biopsi og blastomere biopsi. Videre gir spaltningsstadiumsbiopsi, som VED pb-biopsi, en svært begrenset mengde vev for diagnose, noe som nødvendiggjør utvikling AV enkeltcelle PCR og FISKETEKNIKKER.Selv om teoretisk pb-biopsi og blastocystbiopsi er mindre skadelig enn spaltningsstadiumsbiopsi, er dette fortsatt den utbredte metoden. Den brukes i omtrent 94% AV pgd-syklusene rapportert TIL ESHRE PGD-Konsortiet. Hovedårsakene er at det gir en sikrere og mer komplett diagnose enn pb biopsi og fortsatt gir nok tid til å fullføre diagnosen før embryoene må byttes ut i pasientens livmor, i motsetning til blastocystbiopsi.Av alle spaltningsstadier er det generelt enighet om at det optimale øyeblikket for biopsi er i åtte-celletrinnet. Det er diagnostisk sikrere ENN pb-biopsien, og i motsetning til blastocystbiopsi, tillater det diagnosen av embryoene før dag 5. I dette stadiet er cellene fortsatt totipotente og embryoene komprimeres ennå ikke. Selv om det har vist seg at opptil en fjerdedel av et menneskelig embryo kan fjernes uten å forstyrre utviklingen, gjenstår det fortsatt å bli studert om biopsien til en eller to celler korrelerer med embryoens evne til å videreutvikle, implantere og vokse til en full sikt graviditet.Ikke alle metoder for å åpne zona pellucida har samme suksessrate fordi embryoets og/eller blastomerens velvære kan påvirkes av prosedyren som brukes til biopsien. Zona-boring med syre Tyrodes løsning (ZD) ble sett på i forhold til delvis zona-disseksjon (pzd) for å bestemme hvilken teknikk som ville føre til mer vellykkede graviditeter og ha mindre effekt på embryoet og/eller blastomeren. ZD bruker et fordøyelsesenzym som pronase som gjør det til en kjemisk boremetode. Kjemikaliene som brukes I ZD kan ha en skadelig effekt på embryoet. PZD bruker et glass microneedle å kutte zona pellucida som gjør det til en mekanisk disseksjon metode som vanligvis trenger dyktige hender for å utføre prosedyren. I en studie som inkluderte 71 par, BLE ZD utført i 26 sykluser fra 19 par og PZD ble utført i 59 sykluser fra 52 par. I enkeltcelleanalysen var det en suksessrate på 87,5% I PZD-gruppen og 85,4% I ZD-gruppen. Mors alder, antall oocytter hentet, befruktningsrate og andre variabler var ikke forskjellige MELLOM zd-og PZD-gruppene. DET ble funnet AT PZD førte til en signifikant høyere grad av graviditet (40,7% vs 15,4%), pågående graviditet (35,6% vs 11,5%) og implantasjon (18,1% vs 5,7%) ENN ZD. Dette antyder at bruk av den mekaniske metoden FOR PZD i blastomere biopsier for preimplantasjons genetisk diagnose kan være dyktigere enn å bruke den kjemiske metoden FOR ZD. Suksessen TIL PZD over ZD kan tilskrives det kjemiske stoffet I ZD som har en skadelig effekt på embryoet og/eller blastomeren. For tiden er zona boring ved hjelp av en laser den dominerende metoden for å åpne zona pellucida. Å bruke en laser er en enklere teknikk enn å bruke mekaniske eller kjemiske midler. Laserboring kan imidlertid være skadelig for embryoet, og det er svært dyrt for in vitro befruktningslaboratorier å bruke, spesielt når PGD ikke er en utbredt prosess som i moderne tid. PZD kan være et levedyktig alternativ til disse problemene.

blastocyst biopsyEdit

i et forsøk på å overvinne vanskelighetene knyttet til enkeltcelleteknikker, har det blitt foreslått å biopsi embryoer på blastocyststadiet, noe som gir en større mengde utgangsmateriale for diagnose. Det har vist seg at hvis mer enn to celler er tilstede i samme prøverør, vil de viktigste tekniske problemene med enkeltcelle PCR eller FISK nesten forsvinne. På den annen side, som i tilfelle av spaltningsstadiumbiopsi, kan kromosomale forskjeller mellom den indre cellemassen og trofektodermen (TE) redusere nøyaktigheten av diagnosen, selv om denne mosaikken har blitt rapportert å være lavere enn i spaltningsstadiumembryoer.

te biopsi har vist seg å være vellykket i dyremodeller som kaniner, mus og primater. Disse studiene viser at fjerning AV NOEN TE-celler ikke er skadelig for den videre in vivo-utviklingen av embryoet.

human blastocyststadie biopsi for PGD utføres ved å lage et hull I ZP på dag tre av in vitro kultur. Dette gjør at den utviklende TE kan stikke ut etter blastulasjon, noe som letter biopsien. På dag fem etter befruktning blir omtrent fem celler skåret ut fra TE ved hjelp av en glassnål eller laserenergi, slik at embryoet stort sett er intakt og uten tap av indre cellemasse. Etter diagnose kan embryoene erstattes i samme syklus, eller kryopreserveres og overføres i en etterfølgende syklus.

det er to ulemper med denne tilnærmingen, på grunn av scenen hvor den utføres. Først når bare omtrent halvparten av preimplantasjonsembryoene blastocyststadiet. Dette kan begrense antall blastocysts tilgjengelig for biopsi, og begrenser i noen tilfeller suksessen TIL PGD. Mc Arthur og kollegaer rapporterer at 21% av de startede pgd-syklusene ikke hadde noe embryo egnet FOR te biopsi. Dette tallet er omtrent fire ganger høyere enn gjennomsnittet presentert AV ESHRE PGD consortium data, HVOR PB og spaltningsstadie biopsi er de dominerende rapporterte metoder. På den annen side begrenser forsinkelsen av biopsien til dette sene utviklingsstadiet tiden for å utføre den genetiske diagnosen, noe som gjør det vanskelig å gjenta EN andre RUNDE PCR eller å rehybridisere fiskprober før embryoene skal overføres tilbake til pasienten.

Cumuluscelleprøvingrediger

Prøvetaking av cumulusceller kan utføres i tillegg til prøvetaking av polare legemer eller celler fra embryoet. På grunn av de molekylære interaksjonene mellom cumulusceller og oocyten, kan genuttrykksprofilering av cumulusceller utføres for å estimere oocyttkvalitet og effektiviteten av en ovarial hyperstimuleringsprotokoll, og kan indirekte forutsi aneuploidi, embryoutvikling og graviditetsutfall.

Ikke-Invasive Preimplantasjonsgenetiske Screeningsmetoder (NIPGS)Edit

Tradisjonell embryobiopsi kan være invasiv og kostbar. Derfor har forskere en pågående søken for å finne en mindre invasive metoder for preimplantasjons genetisk testing. Studier på nye ikke-invasive preimplantasjonsgenetiske screeningsmetoder (NIPGS) som blastocoel væske og brukt embryo media har nylig blitt publisert som et alternativ til tradisjonelle metoder

Preimplantasjonsgenetisk Screening Testing Ved Hjelp Av Blastocoel Væske (Bf) under en normal IVF prosess, god praksis å vitrifisere embryoer øker sjansen for en sunn graviditet. Under prosessen med vitrifisering en utviklet blast er dehydrert og det og dets blastocoel hulrom kollapser for fryseprosessen. Det er Mange metoder som har blitt brukt til å lette sammenbruddet, inkludert laserpuls, gjentatt mikropipettering, mikronålpunktur Eller mikrosugering Normalt vil denne væsken da bli kassert, men med preimplantasjonsgenetisk testing AV BL, blir denne væsken lagret og deretter testet FOR DNA. Dette DNA antas å være fra celler som har gått gjennom apoptose funnet i det utviklende embryoet

Preimplantasjonsgenetisk Testing ved Bruk Av Blastocystkulturkondisjonert Medium (BCCM)En annen metode for mindre invasiv preimplantasjonsgenetisk testing innebærer testing av kulturmediet embryoet har utviklet seg i. Det har blitt bemerket at embryoet frigjør DNA-fragmenter fra cellene som har dødd i inkubasjonsperioden. Med denne kunnskapen har forskere begrunnet AT DE kunne isolere DETTE DNA og bruke DET til preimplantasjonsgenetisk testing

fordelene og Konsekvensene av mindre invasiv preimplantasjonsgenetisk testing mens det er motstridende bevis på om de mer tradisjonelle metodene for preimplantasjonsgenetisk testing er skadelige for embryoet, er det nyere metoder for mindre invasive og like effektive testmetoder. Til den effekten har vi slått til preimplantasjons genetisk testing ved hjelp av blastocoel væske og brukte embryo media. Et problem for disse alternativene er den minimale MENGDEN DNA det er å jobbe med. Et annet svært viktig spørsmål er om denne teknologien er nøyaktig eller ikke. Begge disse bekymringene ble nylig behandlet Av Kuznyetsov. Kuznyetsov bestemte seg for å bruke begge metodene som kombinerer MENGDEN DNA hentet fra begge teknikkene. SÅ når DNA ble isolert, ble DET brukt til preimplantasjonsgenetisk testing. Resultatene viste at når begge metodene Blastocyst Væske og Embryo Brukt Media ble brukt i kombinasjon de viste en cordance rate for hele kromosom kopi av 87.5% sammenlignet med trophectoderm, 96,4% sammenlignet med Hele Blastocyst (gullstandard). I tillegg etter forsterkning ved hjelp av denne nye metoden var de i stand til å produsere 25.0-54.0 ng/ul AV DNA per prøve. Med tradisjonelle metoder som trophectoderm samlet de 10 til 44 ng/ul

Genetiske analyseteknikkerrediger

Fluorescerende in situ hybridisering (FISH) og Polymerase chain reaction (PCR) er de to vanlig brukte, første generasjons teknologier I PGD. PCR brukes vanligvis til å diagnostisere monogene lidelser, OG FISK brukes til påvisning av kromosomale abnormiteter (for eksempel aneuploidy screening eller kromosomale translokasjoner). I løpet AV de siste årene har ulike fremskritt I pgd-testing gjort det mulig å forbedre omfanget og nøyaktigheten av resultatene som er tilgjengelige, avhengig av teknologien som brukes. Nylig ble det utviklet en metode som gjør det mulig å fikse metafaseplater fra enkeltblastomerer. Denne teknikken i forbindelse MED FISK, m-FISK kan gi mer pålitelige resultater, siden analyse er gjort på hele metafaseplater

i TILLEGG TIL FISK og PCR, testes enkeltcellegenomsekvensering som en metode for preimplantasjonsgenetisk diagnose. Dette karakteriserer den komplette DNA-sekvensen av genomet av embryoet.

FISHEdit

FISK er den mest brukte metoden for å bestemme kromosomal konstitusjon av et embryo. I motsetning til karyotyping kan den brukes på interfase kromosomer, slik at Den kan brukes På PBs, blastomerer og TE-prøver. Cellene er fiksert på glassmikroskop lysbilder og hybridisert MED DNA-prober. Hver av disse sondene er spesifikke for en del av et kromosom, og er merket med et fluorokrom.

Dual FISH ble ansett for å være en effektiv teknikk for å bestemme kjønn av humane preimplantasjonsembryoer og den ekstra evnen til å oppdage unormale kromosomkopitall, noe som ikke er mulig via polymerasekjedereaksjonen (PCR).

For tiden er et stort panel av prober tilgjengelig for forskjellige segmenter av alle kromosomer, men det begrensede antallet forskjellige fluorokromer begrenser antall signaler som kan analyseres samtidig.

type og antall prober som brukes på en prøve, avhenger av indikasjonen. For kjønnsbestemmelse (brukes for EKSEMPEL NÅR EN PCR-protokoll for en Gitt x-bundet lidelse ikke er tilgjengelig), brukes prober For X-og Y-kromosomene sammen med prober for en eller flere av autosomene som en intern FISKEKONTROLL. Flere prober kan legges til for å se etter aneuploidier, spesielt de som kan gi opphav til en levedyktig graviditet (for eksempel en trisomi 21). Bruken av prober for kromosomer X, Y, 13, 14, 15, 16, 18, 21 og 22 har potensial til å oppdage 70% av aneuploidiene som finnes i spontane aborter.

for å kunne analysere flere kromosomer på samme prøve, kan DET gjennomføres opptil tre PÅFØLGENDE RUNDER MED FISK. I tilfelle av kromosom rearrangements, bestemte kombinasjoner av sonder må velges som flanke regionen av interesse. FISKETEKNIKKEN anses å ha en feilrate på mellom 5 og 10%.

hovedproblemet MED BRUK AV FISK for å studere kromosomal konstitusjon av embryoer er den forhøyede mosaicism rate observert på human preimplantation scenen. En meta-analyse av mer enn 800 embryoer kom til resultatet at ca 75% av preimplantasjonsembryoer er mosaikk, hvorav ca 60% er diploid-aneuploid mosaikk og ca 15% aneuploid mosaikk. Li og medarbeidere fant at 40% av embryoene diagnostisert som aneuploid på dag 3 viste seg å ha en euploid indre cellemasse på dag 6. Staessen og samarbeidspartnere fant at 17.5% av embryoene diagnostisert som unormale under PGS, og utsatt for post-PGD reanalyse, ble funnet å også inneholde normale celler, og 8.4% ble funnet grovt normalt. Som en konsekvens har det blitt stilt spørsmål om den ene eller to celler som studeres fra et embryo, faktisk er representative for det komplette embryoet, og om levedyktige embryoer ikke blir kassert på grunn av teknikkens begrensninger.

PCREdit

Kary Mullis oppfattet PCR i 1985 som en in vitro forenklet reproduksjon av IN vivo-PROSESSEN MED DNA-replikasjon. VED å utnytte de kjemiske egenskapene TIL DNA og tilgjengeligheten av termostabile DNA-polymeraser, TILLATER PCR anrikning AV EN DNA-prøve for en bestemt sekvens. PCR gir mulighet til å skaffe en stor mengde kopier av en bestemt strekning av genomet, noe som gjør videre analyse mulig. Det er en svært sensitiv og spesifikk teknologi, som gjør den egnet for alle typer genetisk diagnose, inkludert PGD. For tiden finnes det mange forskjellige variasjoner på SELVE PCR, samt på de forskjellige metodene for bakre analyse AV PCR-produktene.NÅR MAN bruker PCR i PGD, står MAN overfor et problem som ikke eksisterer i rutinemessig genetisk analyse: de minste mengder tilgjengelig genomisk DNA. DA PGD utføres på enkeltceller, MÅ PCR tilpasses OG skyves til sine fysiske grenser, og bruke den minste mengden mal som er mulig: som er en streng. Dette innebærer en lang prosess med finjustering AV PCR-forholdene og en følsomhet for alle problemene med konvensjonell PCR, men flere grader intensivert. Det høye antallet NØDVENDIGE PCR-sykluser og den begrensede mengden mal gjør enkeltcelle PCR svært følsom for forurensning. Et annet problem som er spesifikt for enkeltcelle PCR er allel drop out (ADO) fenomenet. Den består av tilfeldig ikke-forsterkning av en av allelene som er tilstede i en heterozygot prøve. ADO kompromitterer alvorlig påliteligheten AV PGD da et heterozygot embryo kan diagnostiseres som berørt eller upåvirket, avhengig av hvilket allel som ikke ville forsterke. Dette gjelder spesielt I PGD for autosomale dominante lidelser, hvor ADO av det berørte allelet kan føre til overføring av et berørt embryo.Flere PCR – baserte analyser har blitt utviklet for ulike sykdommer som triplett-repeterende gener assosiert med myotonisk dystrofi og fragile X i enkelt humane somatiske celler, gameter og embryoer.

NGSEdit

fra 2014 blir neste generasjons sekvensering (NGS) utført I PGT. Ngs, også kjent som massiv parallell sekvensering, er en gruppe teknikker som er i stand til å sekvensere STORE mengder DNA til en rimelig pris og tid. Det kan gi oss et generelt perspektiv på hele embryo genomet, inkludert mitokondriell en. Disse teknikkene er basert på sekvensering kort leser rundt 400 baser hver og overlappende disse leser med kraftig justering programvare.På SAMME måte tillater NGS oss også å oppdage aneuploidier i de 24 kromosomene og enkeltgenfeilene når det er en indikasjon fra bæreforeldrene. Den største fordelen er AT NGS kan kombinere deteksjon av både aneuploidier og monogene sykdommer med en enkelt biopsi og har redusert rimelige kostnader, noe som gjør den mer tilgjengelig.to EKSEMPLER på NGS er pyrosequencing og reversibel dye terminator.

Etablere en diagnoserediger

etablering av en diagnose I PGD er ikke alltid grei. Kriteriene for valg av embryoer som skal erstattes etter FISK eller PCR-resultater er ikke like i alle sentre.FOR FISK er det i noen sentre bare embryoer som er funnet å være kromosomalt normale (det vil si viser to signaler for gonosomene og de analyserte autosomene) etter analysen av en eller to blastomerer, og når to blastomerer analyseres, bør resultatene være samsvarende. Andre sentre hevder at embryoer diagnostisert som monosomisk kan overføres, fordi falsk monosomi (dvs.tap AV ETT FISKESIGNAL i en normal diploid celle) er den hyppigst forekommende feildiagnosen. I disse tilfellene er det ingen risiko for aneuploid graviditet, og normale diploide embryoer går ikke tapt for overføring på GRUNN AV EN fiskefeil. Videre har det vist seg at embryoer diagnostisert som monosomisk på dag 3 (unntatt kromosomer X og 21), aldri utvikler seg til blastocyst, noe som korrelerer med det faktum at disse monosomiene aldri blir observert i pågående svangerskap.Diagnose Og feildiagnostisering i PGD VED BRUK AV PCR har blitt matematisk modellert i Arbeidet Til Navidi Og Arnheim og Lewis og samarbeidspartnere. Den viktigste konklusjonen av disse publikasjonene er at for effektiv og nøyaktig diagnose av et embryo er det nødvendig med to genotyper. Dette kan være basert på en koblet markør og sykdom genotyper fra en enkelt celle eller på markør / sykdom genotyper av to celler. Et interessant aspekt utforsket i disse papirene er den detaljerte studien av alle mulige kombinasjoner av alleler som kan vises I PCR-resultatene for et bestemt embryo. Forfatterne indikerer at noen av genotypene som kan oppnås under diagnose, kanskje ikke er i samsvar med det forventede mønsteret av koblede markørgenotyper, men gir fortsatt tilstrekkelig tillit til den upåvirkede genotypen av embryoet. Selv om disse modellene er betryggende, er de basert på en teoretisk modell, og generelt er diagnosen etablert på et mer konservativt grunnlag, med sikte på å unngå muligheten for feildiagnose. Når uventede alleler vises under analysen av en celle, avhengig av den observerte genotypen, anses det at enten en unormal celle har blitt analysert eller at forurensning har oppstått, og at ingen diagnose kan etableres. Et tilfelle der abnormiteten til den analyserte cellen kan identifiseres tydelig, er når det ved HJELP AV EN MULTIPLEX PCR for koblede markører bare finnes alleler av en av foreldrene i prøven. I dette tilfellet kan cellen betraktes som å bære en monosomi for kromosomet som markørene befinner seg på, eller muligens som haploid. Utseendet til en enkelt allel som indikerer en berørt genotype anses å være tilstrekkelig til å diagnostisere embryoet som berørt, og embryoer som har blitt diagnostisert med en komplett upåvirket genotype, foretrekkes for erstatning. Selv om denne policyen kan føre til et lavere antall upåvirkede embryoer som er egnet for overføring, anses det å være å foretrekke for muligheten for feildiagnose.

preimplantasjonsgenetisk haplotypingrediger

preimplantasjons genetisk haplotyping (PGH) er en PGD teknikk der en haplotype av genetiske markører som har statistiske assosiasjoner til en målsykdom er identifisert i stedet for mutasjonen som forårsaker sykdommen.

Når et panel av tilknyttede genetiske markører er etablert for en bestemt sykdom, kan den brukes til alle bærere av den sykdommen. I kontrast, siden selv en monogen sykdom kan skyldes mange forskjellige mutasjoner i det berørte genet, vil konvensjonelle pgd-metoder basert på å finne en bestemt mutasjon kreve mutasjonsspesifikke tester. DERMED utvider PGH tilgjengeligheten AV PGD til tilfeller der mutasjonsspesifikke tester ikke er tilgjengelige.PGH har også en fordel i FORHOLD TIL FISK ved at FISK vanligvis ikke er i stand til å skille mellom embryoer som har balansert form av en kromosomal translokasjon og de som bærer de homologe normale kromosomene. Denne manglende evne kan være alvorlig skadelig for diagnosen. PGH kan gjøre forskjellen SOM FISK ofte ikke kan. PGH gjør dette ved å bruke polymorfe markører som er bedre egnet til å gjenkjenne translokasjoner. Disse polymorfe markørene er i stand til å skille mellom embryoer som bærer normale, balansert og ubalansert translokasjoner. FISK krever også mer cellefiksering for analyse, MENS PGH bare krever overføring av celler til polymerasekjedereaksjonsrør. Celleoverføringen er en enklere metode og gir mindre rom for analysefeil.

embryooverføring og kryopreservering av embryooverskudd [rediger / rediger kilde]

embryooverføring utføres vanligvis på dag tre eller dag fem etter befruktning, tidspunktet avhenger av teknikkene som brukes FOR PGD og standardprosedyrene TIL IVF-senteret hvor Det utføres.

med introduksjonen I Europa av single-embryo overføringspolitikken, som tar sikte på å redusere forekomsten av flere graviditeter ETTER ART, blir vanligvis ett embryo eller tidlig blastocyst erstattet i livmoren. Serum hCG bestemmes på dag 12. Hvis en graviditet er etablert, utføres en ultralydsundersøkelse på 7 uker for å bekrefte tilstedeværelsen av føtale hjerteslag. Par anbefales generelt å gjennomgå PND på grunn av, om enn lav, risiko for feildiagnose.Det er ikke uvanlig at etter PGD er det flere embryoer som er egnet for overføring tilbake til kvinnen enn nødvendig. For parene som gjennomgår PGD, er disse embryoene svært verdifulle, da parets nåværende syklus ikke kan føre til en pågående graviditet. Embryo nedfrysing og senere tining og erstatning kan gi dem en ny sjanse til graviditet uten å måtte gjøre om tungvint OG dyrt ART og PGD prosedyrer.