PGD er en form for genetisk diagnose udført før implantation. Dette indebærer, at patientens oocytter skal befrugtes in vitro, og embryonerne holdes i kultur, indtil diagnosen er etableret. Det er også nødvendigt at udføre en biopsi på disse embryoner for at få materiale til at udføre diagnosen. Diagnosen selv kan udføres ved hjælp af flere teknikker afhængigt af arten af den studerede tilstand. Generelt anvendes PCR-baserede metoder til monogene lidelser og fisk til kromosomale abnormiteter og til kønsbestemmelse af de tilfælde, hvor der ikke er nogen PCR-protokol tilgængelig for en KSB-forbundet sygdom. Disse teknikker skal tilpasses til at blive udført på blastomerer og skal testes grundigt på enkeltcellemodeller inden klinisk brug. Endelig, efter embryoudskiftning, overskydende upåvirkede embryoner af god kvalitet kan kryokonserveres, optøes og overføres tilbage i en næste cyklus.

indhentning af embryoerredit

i øjeblikket opnås alle PGD-embryoner ved hjælp af assisteret reproduktionsteknologi, skønt brugen af naturlige cyklusser og in vivo befrugtning efterfulgt af livmoderskylning blev forsøgt i fortiden og er nu stort set opgivet. For at opnå en stor gruppe oocytter gennemgår patienterne kontrolleret ovariestimulering (COH). COH udføres enten i en agonistprotokol ved anvendelse af gonadotropinfrigivende hormon (GnRH) – analoger til hypofysedesensibilisering kombineret med humane menopausale gonadotropiner (hMG) eller rekombinant follikelstimulerende hormon (FSH) eller en antagonistprotokol ved anvendelse af rekombinant FSH kombineret med en GnRH-antagonist i henhold til klinisk vurdering af patientens profil (alder, kropsmasseindeks (BMI), endokrine parametre). hCG administreres, når mindst tre follikler på mere end 17 mm gennemsnitlig diameter ses ved transvaginal ultralydsscanning. Transvaginal ultralydstyret oocytudtagning er planlagt 36 timer efter hCG-administration. Lutealfasetilskud består af daglig intravaginal administration af 600 kg naturligt mikroniseret progesteron.

oocytter er omhyggeligt denuderet fra cumuluscellerne, da disse celler kan være en kilde til kontaminering under PGD, hvis PCR-baseret teknologi anvendes. I de fleste af de rapporterede cyklusser anvendes intracytoplasmisk sædinjektion (ICSI) i stedet for IVF. De vigtigste årsager er at forhindre forurening med resterende sæd, der er klæbet til området pellucida og for at undgå uventet befrugtningsfejl. ICSI-proceduren udføres på modne metafase-II-oocytter, og befrugtning vurderes 16-18 timer efter. Embryonudviklingen evalueres yderligere hver dag før biopsi og indtil overførsel til kvindens livmoder. Under spaltningstrinnet udføres embryoevaluering dagligt på basis af antallet, størrelsen, celleformen og fragmenteringshastigheden af blastomerer. På dag 4 blev embryoner scoret i funktion af deres komprimeringsgrad, og blastocyster blev evalueret i henhold til kvaliteten af throphectoderm og den indre cellemasse og deres ekspansionsgrad.

Biopsiprocedurerrediger

da PGD kan udføres på celler fra forskellige udviklingsstadier, varierer biopsiprocedurerne i overensstemmelse hermed. Teoretisk kan biopsien udføres i alle præimplantationstrin, men kun tre er blevet foreslået: på ubefrugtede og befrugtede oocytter (for polære legemer, PBs), på dag tre embryoner i spaltningstrin (for blastomerer) og på blastocyster (for trophectodermceller).

biopsiproceduren involverer altid to trin: åbning af området pellucida og fjernelse af cellen(e). Der er forskellige tilgange til begge trin, herunder mekanisk, kemisk og fysisk (Tyrodes sure opløsning) og laserteknologi til overtrædelse af området pellucida, ekstrudering eller aspiration til fjernelse af PBs og blastomerer og herniation af trophectoderm-cellerne.

Polar body biopsyEdit

en polær kropsbiopsi er prøveudtagningen af en polær krop, som er en lille haploid celle, der dannes samtidigt som en ægcelle under oogenese, men som generelt ikke har evnen til at blive befrugtet. Sammenlignet med en blastocystbiopsi kan en polær kropsbiopsi potentielt have lavere omkostninger, mindre skadelige bivirkninger og mere følsom ved påvisning af abnormiteter. Den største fordel ved brugen af polære legemer i PGD er, at de ikke er nødvendige for en vellykket befrugtning eller normal embryonal udvikling, hvilket sikrer ingen skadelig virkning for embryoet. En af ulemperne ved PB-biopsi er, at den kun giver information om moderens Bidrag til embryoet, hvorfor tilfælde af maternelt nedarvede autosomale dominerende og Ksbundne lidelser, der udelukkende overføres maternelt, kan diagnosticeres, og autosomale recessive lidelser kan kun delvist diagnosticeres. En anden ulempe er den øgede risiko for diagnostisk fejl, for eksempel på grund af nedbrydning af det genetiske materiale eller rekombinationsbegivenheder, der fører til heterosygøse første polære legemer.

Spaltningstrinsbiopsi (blastomerbiopsi)Rediger

Spaltningstrinsbiopsi udføres generelt morgenen på dag tre efter befrugtning, når normalt udviklende embryoner når otte-celletrinnet. Biopsien udføres normalt på embryoner med mindre end 50% af anukleerede fragmenter og i et 8-celle eller senere udviklingsstadium. Et hul er lavet i området pellucida, og en eller to blastomerer indeholdende en kerne suges forsigtigt eller ekstruderes gennem åbningen.Den største fordel ved spaltningstrinsbiopsi i forhold til PB-analyse er, at begge forældres genetiske input kan studeres. På den anden side viser det sig, at spaltningstrin embryoner har en høj grad af kromosomal mosaicisme, hvilket sætter spørgsmålstegn ved, om resultaterne opnået på en eller to blastomerer vil være repræsentative for resten af embryoet. Det er derfor, at nogle programmer bruger en kombination af PB biopsi og blastomere biopsi. Desuden giver spaltningstrinsbiopsi, som i tilfælde af PB-biopsi, en meget begrænset mængde væv til diagnose, hvilket nødvendiggør udviklingen af encellet PCR og fisketeknikker.Selvom teoretisk PB-biopsi og blastocystbiopsi er mindre skadelige end spaltningstrinsbiopsi, er dette stadig den fremherskende metode. 94% af de PGD-cyklusser, der indberettes til ESHRE PGD-konsortiet. Hovedårsagerne er, at det giver mulighed for en sikrere og mere komplet diagnose end PB-biopsi og stadig giver tid nok til at afslutte diagnosen, før embryonerne skal udskiftes i patientens livmoder, i modsætning til blastocystbiopsi.Af alle spaltningstrin er det generelt aftalt, at det optimale øjeblik for biopsi er på otte-celletrinnet. Det er diagnostisk sikrere end PB-biopsien, og i modsætning til blastocystbiopsi giver det mulighed for diagnose af embryonerne før Dag 5. I dette trin er cellerne stadig totipotente, og embryonerne komprimeres endnu ikke. Selvom det har vist sig, at op til en fjerdedel af et humant embryo kan fjernes uden at forstyrre dets udvikling, er det stadig at undersøge, om biopsien af en eller to celler korrelerer med embryoets evne til at videreudvikle, implantere og vokse til en fuld sigt graviditet.

ikke alle metoder til åbning af området pellucida har den samme succesrate, fordi embryoets og/eller blastomeres trivsel kan påvirkes af den procedure, der anvendes til biopsien. I sammenligning med delvis dissektion for at bestemme, hvilken teknik der ville føre til mere vellykkede graviditeter og have mindre effekt på embryoet og/eller blastomeren. Pronase, hvilket gør det til en kemisk boremetode. De kemikalier, der anvendes i DD, kan have en skadelig virkning på embryoet. Dette gør det til en mekanisk dissektionsmetode, der typisk har brug for dygtige hænder til at udføre proceduren. I en undersøgelse, der omfattede 71 par, blev der udført i 26 cyklusser fra 19 par, og der blev udført i 59 cyklusser fra 52 par. I enkeltcelleanalysen var der en succesrate på 87,5% i PSD-gruppen og 85,4% i PSD-gruppen. I de fleste tilfælde er det nødvendigt at foretage en undersøgelse for at sikre, at patienten ikke er i stand til at foretage en undersøgelse. Det blev konstateret, at PSD førte til en signifikant højere graviditetsrate (40,7% mod 15,4%), igangværende graviditet (35,6% mod 11,5%) og implantation (18,1% mod 5,7%) end PSD. Dette antyder, at anvendelse af den mekaniske metode til PSD i blastomerbiopsier til præimplantation genetisk diagnose kan være mere dygtig end anvendelse af den kemiske metode til SD. Dette skyldes, at det kemiske stof har en skadelig virkning på embryoet og/eller blastomeren. I øjeblikket er områdeboring ved hjælp af en laser den dominerende metode til åbning af området pellucida. Brug af en laser er en lettere teknik end at bruge mekaniske eller kemiske midler. Imidlertid kan laserboring være skadelig for embryoet, og det er meget dyrt for in vitro-befrugtningslaboratorier at bruge, især når PGD ikke er en udbredt proces som i moderne tid. PSD kunne være et levedygtigt alternativ til disse problemer.

Blastocyst biopsyEdit

i et forsøg på at overvinde vanskelighederne i forbindelse med enkeltcelleteknikker er det blevet foreslået at biopsi embryoner på blastocyststadiet, hvilket giver en større mængde udgangsmateriale til diagnose. Det har vist sig, at hvis mere end to celler er til stede i det samme prøverør, vil de vigtigste tekniske problemer med enkeltcellet PCR eller fisk næsten forsvinde. På den anden side, som i tilfælde af spaltningstrinsbiopsi, kan de kromosomale forskelle mellem den indre cellemasse og trophectoderm (TE) reducere nøjagtigheden af diagnosen, skønt denne mosaik er rapporteret at være lavere end i spaltningstrin embryoner.

TE biopsi har vist sig at være vellykket i dyremodeller som kaniner, mus og primater. Disse undersøgelser viser, at fjernelsen af nogle TE-celler ikke er skadelig for den videre in vivo-udvikling af embryoet.

human blastocyst-stage biopsi for PGD udføres ved at lave et hul i HP på dag tre af in vitro-kultur. Dette gør det muligt for den udviklende TE at stikke ud efter blastulation, hvilket letter biopsien. På dag fem efter befrugtning udskæres cirka fem celler fra TE ved hjælp af en glasnål eller laserenergi, hvilket efterlader embryoet stort set intakt og uden tab af indre cellemasse. Efter diagnosen kan embryonerne udskiftes i samme cyklus eller kryokonserveres og overføres i en efterfølgende cyklus.

der er to ulemper ved denne tilgang på grund af det stadium, hvor det udføres. For det første når kun ca.halvdelen af præimplantationsembryoerne blastocyststadiet. Dette kan begrænse antallet af blastocyster, der er tilgængelige til biopsi, hvilket i nogle tilfælde begrænser PGD ‘ s succes. Mc Arthur og kolleger rapporterer, at 21% af de startede PGD-cyklusser ikke havde noget embryo, der var egnet til TE-biopsi. Dette tal er cirka fire gange højere end gennemsnittet præsenteret af ESHRE PGD-konsortiets data, hvor PB og spaltningstrinsbiopsi er de overvejende rapporterede metoder. På den anden side begrænser forsinkelsen af biopsien til dette sene udviklingsstadium tiden til at udføre den genetiske diagnose, hvilket gør det vanskeligt at gentage en anden runde PCR eller at rehybridisere FISKESONDER, før embryonerne skal overføres tilbage til patienten.

Cumulus celleprøvningredit

prøveudtagning af cumulusceller kan udføres ud over en prøveudtagning af polære legemer eller celler fra embryoet. På grund af de molekylære interaktioner mellem cumulusceller og oocyten kan genekspressionsprofilering af cumulusceller udføres for at estimere oocytkvalitet og effektiviteten af en ovariehyperstimuleringsprotokol og kan indirekte forudsige aneuploidi, embryoudvikling og graviditetsresultater.

ikke-Invasive Præimplantationsgenetiske screeningsmetoder (NIPGS)Rediger

traditionel embryobiopsi kan være invasiv og dyr. Derfor har forskere en løbende søgen efter at finde en mindre invasive metoder til præimplantationsgenetisk test. Undersøgelser af nye ikke-invasive præimplantationsgenetiske screeningsmetoder (NIPGS) såsom blastocoelvæske og brugte embryomedier er for nylig blevet offentliggjort som et alternativ til traditionelle metoder

Preimplantation genetisk screeningstest ved hjælp af Blastocoelvæske (BF)under en normal IVF-proces øger god praksis til forglasning af embryoner chancen for en sund graviditet. Under forglasningsprocessen dehydreres en udviklet eksplosion, og den og dens blastocoel hulrum kollapser til fryseprocessen. Der er mange metoder, der er blevet brugt til at lette sammenbruddet, herunder laserpuls, gentagen mikropipettering, mikronålpunktur eller mikrosugning normalt vil denne væske derefter kasseres, dog med præimplantationsgenetisk test af BL, denne væske gemmes og testes derefter for DNA. Dette DNA menes at være fra celler, der har gennemgået apoptose fundet i det udviklende embryo

Præimplantationsgenetisk test ved hjælp af Blastocystkulturkonditioneret Medium (BCCM)en anden metode til mindre invasiv præimplantationsgenetisk test involverer test af de kulturmedier, embryoet har udviklet sig i. Det er blevet bemærket, at embryoet frigiver DNA-fragmenter fra cellerne, der er døde inden for inkubationsperioden. Med denne viden har forskere begrundet, at de kunne isolere dette DNA og bruge det til præimplantationsgenetisk test

fordelene og konsekvenserne af mindre invasiv præimplantationsgenetisk testmens der er modstridende beviser for, hvorvidt de mere traditionelle metoder til præimplantationsgenetisk test er skadelige for embryoet, er der nyere metoder til mindre invasive og lige så effektive testmetoder. Med henblik herpå har vi henvendt os til præimplantationsgenetisk test ved hjælp af blastocoelvæske og brugte embryomedier. Et problem med disse alternativer er den minimale mængde DNA, der er at arbejde med. Et andet meget vigtigt spørgsmål er, om denne teknologi er nøjagtig eller ej. Begge disse bekymringer blev for nylig behandlet af Kusnyetsov. Cusnyetsov besluttede at anvende begge metoder, der kombinerer mængden af DNA hentet fra begge teknikker. Så når DNA ‘ et blev isoleret, blev det brugt til præimplantationsgenetisk test. Resultaterne viste, at når begge metoder Blastocystvæske og Embryo brugte medier blev brugt i kombination, viste de en cordansrate for hele kromosomkopien på 87.5% sammenlignet med trophectoderm, 96,4% sammenlignet med hele blastocysten (guldstandard). Derudover efter amplifikation ved hjælp af denne nye metode var de i stand til at producere 25,0-54,0 ng/ul DNA pr. Med traditionelle metoder såsom trophectoderm indsamlede de 10 til 44 ng/ul

genetiske analyseteknikkerredit

fluorescerende in situ hybridisering (FISH) og polymerasekædereaktion (PCR) er de to almindeligt anvendte, første generations teknologier i PGD. PCR bruges generelt til at diagnosticere monogene lidelser, og fisk bruges til påvisning af kromosomale abnormiteter (for eksempel aneuploidi screening eller kromosomale translokationer). I løbet af de sidste par år har forskellige fremskridt inden for PGD-test muliggjort en forbedring af omfanget og nøjagtigheden af de tilgængelige resultater afhængigt af den anvendte teknologi. For nylig blev der udviklet en metode, der gjorde det muligt at fastsætte metafaseplader fra enkeltblastomerer. Denne teknik i forbindelse med fisk, m-fisk kan producere mere pålidelige resultater, da analyse udføres på hele metafaseplader

ud over fisk og PCR testes enkeltcellegenomsekventering som en metode til præimplantationsgenetisk diagnose. Dette karakteriserer den komplette DNA-sekvens af embryonets genom.

FISHEdit

fisk er den mest anvendte metode til bestemmelse af kromosomal sammensætning af et embryo. I modsætning til karyotyping kan den bruges på interfasekromosomer, så den kan bruges på PBS, blastomerer og TE-prøver. Cellerne er fikseret på glasmikroskopglas og hybridiseret med DNA-prober. Hver af disse prober er specifikke for en del af et kromosom og er mærket med et fluorokrom.

Dual FISH blev anset for at være en effektiv teknik til bestemmelse af køn af humane præimplantationsembryoner og den yderligere evne til at detektere unormale kromosomkopieringsnumre, hvilket ikke er muligt via polymerasekædereaktionen (PCR).

i øjeblikket er et stort panel af prober tilgængelige for forskellige segmenter af alle kromosomer, men det begrænsede antal forskellige fluorokromer begrænser antallet af signaler, der kan analyseres samtidigt.

typen og antallet af prober, der anvendes på en prøve, afhænger af indikationen. Når en PCR-protokol ikke er tilgængelig), anvendes prober til HS-og Y-kromosomerne sammen med prober til en eller flere af autosomerne som en intern FISKEKONTROL. Flere sonder kan tilføjes for at kontrollere for aneuploidier, især dem, der kan give anledning til en levedygtig graviditet (såsom en trisomi 21). Anvendelse af prober til kromosomer, 13, 14, 15, 16, 18, 21 og 22 har potentialet til at opdage 70% af de aneuploidier, der findes i spontane aborter.

for at kunne analysere flere kromosomer på den samme prøve kan der udføres op til tre på hinanden følgende runder fisk. I tilfælde af kromosomomlejringer skal der vælges specifikke kombinationer af sonder, der flankerer regionen af interesse. Fisketeknikken anses for at have en fejlfrekvens mellem 5 og 10%.

hovedproblemet med brugen af fisk til at studere den kromosomale sammensætning af embryoner er den forhøjede mosaicisme, der observeres i det menneskelige præimplantationsstadium. En metaanalyse af mere end 800 embryoner kom til det resultat, at ca.75% af præimplantationsembryoner er mosaik, hvoraf ca. 60% er diploid–aneuploid mosaik og ca. 15% aneuploid mosaik. Li og kolleger fandt ud af, at 40% af de embryoner, der blev diagnosticeret som aneuploid på dag 3, viste sig at have en euploid indre cellemasse på dag 6. Staessen og samarbejdspartnere fandt, at 17,5% af de embryoner, der blev diagnosticeret som unormale under PGS, og udsat for reanalyse efter PGD, viste sig også at indeholde normale celler, og 8,4% blev fundet groft normale. Som en konsekvens er det blevet stillet spørgsmålstegn ved, om den ene eller to celler, der er undersøgt fra et embryo, faktisk er repræsentative for det komplette embryo, og om levedygtige embryoner ikke kasseres på grund af teknikkens begrænsninger.

PCREdit

Kary Mullis udtænkte PCR i 1985 som en in vitro forenklet reproduktion af in vivo-processen med DNA-replikation. Ved at udnytte de kemiske egenskaber ved DNA og tilgængeligheden af termostabile DNA-polymeraser muliggør PCR berigelse af en DNA-prøve for en bestemt sekvens. PCR giver mulighed for at opnå en stor mængde kopier af en bestemt strækning af genomet, hvilket muliggør yderligere analyse. Det er en meget følsom og specifik teknologi, der gør den velegnet til alle former for genetisk diagnose, inklusive PGD. I øjeblikket findes der mange forskellige variationer på selve PCR såvel som på de forskellige metoder til den bageste analyse af PCR-produkterne.

når man bruger PCR i PGD, står man over for et problem, der ikke findes i rutinemæssig genetisk analyse: de små mængder af tilgængeligt genomisk DNA. Da PGD udføres på enkeltceller, skal PCR tilpasses og skubbes til dets fysiske grænser og bruge den mindste mængde skabelon, der er mulig: som er en streng. Dette indebærer en lang proces med finjustering af PCR-betingelserne og en modtagelighed for alle problemerne med konventionel PCR, men flere grader intensiveret. Det høje antal nødvendige PCR-cyklusser og den begrænsede mængde skabelon gør PCR med en celle meget følsom over for kontaminering. Et andet problem, der er specifikt for PCR med en celle, er fænomenet allel drop out (ADO). Den består af den tilfældige ikke-amplifikation af en af de alleler, der er til stede i en heterosygøs prøve. ADO kompromitterer alvorligt pålideligheden af PGD, da et heterosygøst embryo kunne diagnosticeres som påvirket eller upåvirket afhængigt af hvilken allel der ikke ville forstærke. Dette gælder især i PGD for autosomale dominerende lidelser, hvor ADO af den berørte allel kan føre til overførsel af et berørt embryo.der er udviklet flere PCR-baserede analyser til forskellige sygdomme som triplet-gentagelsesgener forbundet med myotonisk dystrofi og skrøbelig H i enkelte humane somatiske celler, kønsceller og embryoner.

NGSEdit

fra 2014 udføres næste generations sekventering (NGS) i PGT. NGS, også kendt som massiv parallel sekventering, er en gruppe teknikker, der er i stand til at sekvensere store mængder DNA til en rimelig pris og tid. Det kan give os et generelt perspektiv på det komplette embryongenom, herunder mitokondrielle. Disse teknikker er baseret på sekventering af korte læsninger omkring 400 baser hver og overlapper disse læsninger med kraftfulde justeringsprogrammer.

ligeledes tillader NGS os også at detektere aneuploidier i de 24 kromosomer og enkeltgenfejl, når der er en indikation fra bærerforældrene. Den største fordel er, at NGS kan kombinere påvisning af både aneuploidier og monogene sygdomme med en enkelt biopsi og har reduceret overkommelige omkostninger, hvilket gør den mere tilgængelig.

to eksempler på NGS er pyrosekventeringen og den reversible farvestofterminator.

etablering af en diagnoseredit

etablering af en diagnose i PGD er ikke altid ligetil. Kriterierne for valg af embryoner, der skal udskiftes efter FISH-eller PCR-resultater, er ikke ens i alle centre.I tilfælde af fisk udskiftes kun embryoner i nogle centre, der viser sig at være kromosomalt normale (dvs.viser to signaler for gonosomerne og de analyserede autosomer) efter analysen af en eller to blastomerer, og når to blastomerer analyseres, skal resultaterne være overensstemmende. Andre centre hævder, at embryoner diagnosticeret som monosomiske kunne overføres, fordi den falske monosomi (dvs.tab af et FISKESIGNAL i en normal diploid celle) er den hyppigst forekommende fejldiagnose. I disse tilfælde er der ingen risiko for en aneuploid graviditet, og normale diploide embryoner går ikke tabt til overførsel på grund af en FISKEFEJL. Desuden har det vist sig, at embryoner diagnosticeret som monosomiske på dag 3 (bortset fra kromosomer H og 21) aldrig udvikler sig til blastocyst, hvilket korrelerer med det faktum, at disse monosomier aldrig observeres i igangværende graviditeter.

diagnose og fejldiagnose i PGD ved hjælp af PCR er matematisk modelleret i Navidi og Arnheims arbejde. Den vigtigste konklusion af disse publikationer er, at for en effektiv og nøjagtig diagnose af et embryo kræves to genotyper. Dette kan være baseret på en sammenkædet markør og sygdomsgenotyper fra en enkelt celle eller på markør/sygdomsgenotyper af to celler. Et interessant aspekt udforsket i disse papirer er den detaljerede undersøgelse af alle mulige kombinationer af alleler, der kan forekomme i PCR-resultaterne for et bestemt embryo. Forfatterne indikerer, at nogle af de genotyper, der kan opnås under diagnosen, muligvis ikke er i overensstemmelse med det forventede mønster af sammenkædede markørgenotyper, men giver stadig tilstrækkelig tillid til den upåvirkede genotype af embryoet. Selvom disse modeller er betryggende, er de baseret på en teoretisk model, og generelt er diagnosen etableret på et mere konservativt grundlag med det formål at undgå muligheden for fejldiagnose. Når uventede alleler vises under analysen af en celle, afhængigt af den observerede genotype, anses det for, at enten en unormal celle er blevet analyseret, eller at der er forekommet kontaminering, og at der ikke kan etableres nogen diagnose. Et tilfælde, hvor abnormiteten i den analyserede celle klart kan identificeres, er, når der ved hjælp af en multipleks PCR til sammenkædede markører kun findes alleler fra en af forældrene i prøven. I dette tilfælde kan cellen betragtes som bærer en monosomi for det kromosom, hvorpå markørerne er placeret, eller muligvis som haploid. Udseendet af en enkelt allel, der indikerer en påvirket genotype, betragtes som tilstrækkelig til at diagnosticere embryoet som påvirket, og embryoner, der er diagnosticeret med en komplet upåvirket genotype, foretrækkes til udskiftning. Selvom denne politik kan føre til et lavere antal upåvirkede embryoner, der er egnede til overførsel, anses det for at være at foretrække frem for muligheden for en fejldiagnose.

præimplantation genetisk haplotyperedit

preimplantation genetisk haplotyping (PGH) er en PGD-teknik, hvor en haplotype af genetiske markører, der har statistiske tilknytninger til en målsygdom, identificeres snarere end den mutation, der forårsager sygdommen.

når et panel af tilknyttede genetiske markører er etableret for en bestemt sygdom, kan det bruges til alle bærere af denne sygdom. I modsætning hertil, da selv en monogen sygdom kan være forårsaget af mange forskellige mutationer inden for det berørte gen, ville konventionelle PGD-metoder baseret på at finde en specifik mutation kræve mutationsspecifikke tests. PGH udvider således tilgængeligheden af PGD til tilfælde, hvor mutationsspecifikke tests ikke er tilgængelige.

PGH har også en fordel i forhold til fisk, idet fisk normalt ikke er i stand til at skelne mellem embryoner, der har den afbalancerede form af en kromosomal translokation, og dem, der bærer de homologe normale kromosomer. Denne manglende evne kan være alvorligt skadelig for den stillede diagnose. PGH kan skelne mellem, at fisk ofte ikke kan. PGH gør dette ved at bruge polymorfe markører, der er bedre egnet til at genkende translokationer. Disse polymorfe markører er i stand til at skelne mellem embryoner, der bar normale, afbalancerede og ubalancerede translokationer. Fisk kræver også mere cellefiksering til analyse, mens PGH kun kræver overførsel af celler til polymerasekædereaktionsrør. Celleoverførslen er en enklere metode og giver mindre plads til analysefejl.

embryooverførsel og kryopræservering af overskydende embryonredit

embryooverførsel udføres normalt på dag tre eller dag fem efter befrugtning, timingen afhængigt af de teknikker, der anvendes til PGD og standardprocedurerne for IVF-centret, hvor det udføres.

Med introduktionen i Europa af politikken for overførsel af et enkelt embryo, der sigter mod reduktion af forekomsten af flere graviditeter efter ART, udskiftes normalt et embryo eller en tidlig blastocyst i livmoderen. Serum hCG bestemmes på dag 12. Hvis en graviditet er etableret, udføres en ultralydsundersøgelse efter 7 uger for at bekræfte tilstedeværelsen af et føtal hjerteslag. Par rådes generelt til at gennemgå PND på grund af, omend lav, risiko for fejldiagnose.

det er ikke usædvanligt, at der efter PGD er flere embryoner, der er egnede til at overføre tilbage til kvinden end nødvendigt. For de par, der gennemgår PGD, er disse embryoner meget værdifulde, da parrets nuværende cyklus muligvis ikke fører til en løbende graviditet. Embryokryopreservation og senere optøning og udskiftning kan give dem en ny chance for graviditet uden at skulle gentage de besværlige og dyre ART-og PGD-procedurer.